Окрашивание

редактировать
Техника, используемая для усиления контраста образцов, наблюдаемых под микроскопом Окрашенный гистологический образец, зажатый между стекло предметное стекло.

Окрашивание - это метод, для увеличения контраста в образцах, как правило, на микроскопическом уровне. Красители и красители часто используются в гистологии (исследование тканей под микроскопом) и в медицинских областях гистопатологии, гематология и цитопатология, фокусируются на исследовании и диагностируют заболевание на микроскопическом уровне. Красители Массачусетский язык биологических тканей (выделение, например, мышечных волокон или соединительной ткани ), клеточных популяций (классификация различных клетки крови ) или органеллы внутри отдельных клеток.

В биохимии это включает добавление специфичных для класса (ДНК, белков, липидов, углеводов ) для окрашивания субстрата для определения или количественного присутствия конкретного соединения. Окрашивание и флуоресцентная маркировка могут служить аналогичным целям. Биологическое окрашивание также используется для маркировки клеток в проточной цитометрии и для маркировки белков или нуклеиновых кислот в гель-электрофорезе.

Окрашивание не ограничено к биологическим материалов, его также можно использовать для изучения структуры других материалов, например ламеллярных структур полукристаллических полимеров или доменных структур блок-сополимеров.

Содержание

  • 1 In vivo против In vitro
  • 2 Микроскопия при окрашивании
  • 3 Подготовка
    • 3.1 Стандартизация
    • 3.2 Отрицательное окрашивание
    • 3.3 Положительное окрашивание
    • 3.4 Простое окрашивание в сравнении с дифференциальным окрашиванием
    • 3.5 Типы окрашивания Методы
  • 4 Специальные методы
    • 4.1 Окрашивание по Граму
    • 4.2 Окрашивание эндоспор
    • 4.3 Окрашивание по Цилю-Нильсену
    • 4.4 Окрашивание гематоксилином и эозином (HE)
    • 4.5 Окрашивание по Папаниколау
    • 4.6 Окрашивание PAS
    • 4,7 Трихром Массона
    • 4,8 Окрашивание по Романовскому
    • 4,9 Окрашивание серебром
    • 4,10 Окрашивание Суданом
    • 4,11 Окрашивание Виртца-Конклина
    • 4,12 Коллаген Гибридизирующее пептидное окрашивание
  • 5 Обычные биологические пятна
    • 5.1 Акридиновый оранжевый
    • 5.2 Бисмарк коричневый
    • 5.3 Кармин
    • 5.4 Кумасси синий
    • 5.5 Крезиловый фиолетовый
    • 5.6 Кристаллический фиолетовый
    • 5.7 DAPI
    • 5,8 Эозин
    • 5,9 Бромид этидия
    • 5,10 Кислотный фуксин
    • 5,11 Гематоксилин
    • 5,12 Пятна по Хёхсту
    • 5,13 Йод
    • 5,14 Малахитовый зеленый
    • 5, 15 Метиловый зеленый
    • 5,16 Метилен синий
    • 5.17 Нейтральный красный
    • 5.18 Нильский синий
    • 5.19 Нильский красный
    • 5.20 Тетроксид осмия (официальное название: тетраоксид осмия)
    • 5.21 Иодид пропидия
    • 5.22 Родамин
    • 5.23 Сафранин
  • 6 Окрашиваемость тканей
  • 7 Электронная микроскопия
    • 7.1 Фосфорновольфрамовая кислота
    • 7.2 Тетроксид осмия
    • 7.3 Тетроксид рутения
  • 8 См. Также
  • 9 Ссылки
  • 10 Дополнительная литература
  • 11 Внешние ссылки

In vivo vs In vitro

In vivo окрашивание (также называемое витальным окрашиванием или прижизненным окрашиванием) - это процесс окрашивания живых тканей. Заставляя форму клетки или структуру приобретать контрастный цвет (а), их (морфология ) или положение в клетке или ткани можно легко и изучить. Обычная цель - выявить цитологические детали, которые иначе могли бы быть неочевидными; однако окрашивание также может выявить, когда искусственные химические вещества или химические вещества происходит в клетках или тканях.

Окрашивание in vitro включает окрашивание клеток или структур, которые были удалены из их биологического контекста. Некоторые пятна часто объединяются, чтобы выявить больше деталей, чем отдельное пятно. В сочетании со специальными протоколами фиксации и образцов подготовки ученых и врачи могут использовать эти стандартные методы в качестве последовательных, повторяемых диагностических инструментов. Контрастное пятно - это пятно, которое делает клетки или структуры более видимыми, когда они не полностью видны с основным пятном.

  • Кристаллический фиолетовый окрашивает как грамположительные, так и грамотрицательные организмы. Обработка спиртом удаляет кристаллический фиолетовый цвет только у грамотрицательных организмов. Сафранин в качестве контрастного красителя используется для окрашивания грамотрицательных организмов, обесцвеченных алкоголем.

Хотя ex vivo, многие продолжают жить и метаболизировать, пока они не «закрепятся». Некоторые методы окрашивания основаны на этом свойстве. Эти пятна, исключенные живыми клетками, но поглощенные уже мертвыми клетками, называются трипановым синим или пропидиум иодидом для эукариотических клеток). Пятна, которые проникают в живые клетки и окрашивают их, называются суправитальными пятнами (например, Новый метиленовый синий и бриллиантовым крезиловым синимом для окрашивания ретикулоцитов ). Однако в конечном итоге эти пятна являются токсичными для организма, некоторыми в большей степени, чем другие. Частично из-за их токсического поведения внутри живых клеток, когда суправитальные пятна попадают в клетку, они могут давать характерный паттерн окрашивания, отличный от окрашивания уже фиксированной клетки (например, вид «ретикулоцитов» по ​​сравнению с диффузной «полихромазией»). Для достижения желаемого эффекта красители используются в очень разбавленных растворах от 1: 5000 до 1: 500000 (Howey, 2000). Обратите внимание, что многие красители можно использовать как в живых, так и в фиксированных клетках.

Микроскоп при окрашивании

Обычным микроскопом, используемым для окрашивания, светлопольный микроскоп. Светлопольный микроскоп относится к категории световых микроскопов из-за осветителя, который излучает свет для создания яркого фона. Эти микроскопы обычно бинокулярные, что означает наличие двух окуляров с десятикратным изображением. При просмотре окрашенных организмов необходимо создать более четкое изображение из-за искажения разрешения из-за преломления света, которое становится невероятно выраженным при большом увеличении.

Подготовка

Необходимые подготовительные шаги зависят от типа запланированного анализа; Могут потребоваться некоторые или все из следующих процедур.

Влажные крепления - влажные крепления используются для наблюдения за живыми организмами и могут быть изготовлены с использованием воды и некоторых пятен. Жидкость добавляется на предметное стекло перед добавлением микроорганизмов, и покровное стекло помещается на образец в воде и окрашивается, чтобы помочь удержать его в пределах поля зрения .

Фиксация - что сам по себе может состоять несколькими из нескольких этапов, направленных на максимальное сохранение формы вовлеченных клеток или тканей. Иногда термофиксация используется для уничтожения, прилипания и изменения образца, чтобы он впитал пятна. Большинство химических фиксаторов (химические вещества, вызывающие фиксацию) образуют химические связи между белками и другими веществами в образце, увеличивая их жесткость. Обычные фиксаторы включают формальдегид, этанол, метанол и / или пикриновую кислоту. Кусочки ткани могут быть залиты парафиновым воском для повышения их механической прочности и стабильности, а также для облегчения разрезания на тонкие ломтики. Протравливание: Это химические вещества, обладающие способностью создавать красители для окрашивания материалов, которые не поддаются окрашиванию

Протравы подразделяются на две категории:

а) Основная протрава: ает в реакцию с кислотными красителями, например квасцы, сульфат железа, хлорид цетилпиридиния и т. д.

б) Кислотная протрава: вступает в реакцию с вызывающими красителями, например пикриновая кислота, дубильная кислота и др.

Прямое окрашивание: Без протравы.

Непрямое окрашивание: Пятно, нанесенное с помощью протравы.

В таблице методов непрямого окрашивания и протравы, применяемых в каждом:
SR No.Название метода непрямого окрашиванияНазвание применяемой протравы
1.)Окрашивание по ГрамуЙод по Граму
2.)Окрашивание клеточной стенки

а.) Метод Рингера

б.) Метод Дьяра

10% дубильная кислота

0,34% CPC

3.)Окрашивание жгутиков

а.) Метод Лейфсона

б.) Метод Леффлера

Дубильная кислота по Лейфсону пятно

протрава Леффлера (20% дубильная кислота)

4.)окрашивание спирохетами

а.) Метод Фонтаны

б.) Метод Беккера

протрава Фонтаны (5% дубильная кислота)

протрава Фонтаны (5% дубильная кислота)

Повышение проницаемости включает обработку клеток (обычно) мягким поверхностно-активным веществом. Эта обработка растворяет клеточные мембраны и позволяет более крупным молекулам красителя проникать внутрь клетки.

Установка обычно включает прикрепление образца к предметному стеклу микроскопа для наблюдения и анализа. В некоторых случаях клетки можно выращивать прямо на предметном стекле. Для образцов рыхлых клеток крови (например, мазка или мазка Папаниколау ) образец можно наносить непосредственно на предметное стекло. Для более крупных кусков ткани делаются тонкие срезы (срезы) с использованием микротома ; затем эти срезы можно смонтировать и проверить.

Стандартизация

Большинство красителей, обычно используемых в микроскопии, доступны в виде BSC-сертифицированных красителей . Это означает, что образцы партии производителя протестированы независимым органом, Комиссией по биологическим пятнам (BSC ), и было установлено, что они соответствуют или превышают стандарты чистоты, содержания красителя и эффективность методов. окрашивания, обеспечивающая более точное выполнение экспериментов и более надежные результаты. Эти стандарты опубликованы в журнале Комиссии Биотехника и гистохимия. Состав многих красителей от одного поставщика к другому различается. Использование красителей, сертифицированных BSC, устраняет источник неожиданных результатов.

Некоторые поставщики продают пятна, «сертифицированные» сами по себе, а не Комиссией по биологическим пятнам. Такие продукты могут подходить или не подходить для диагностических и других применений.

Отрицательное окрашивание

Пример отрицательное окрашивание

Простой метод жизни бактерий, который обычно бывает успешным, даже если методы положительного окрашивания не работают, следует использовать отрицательное окрашивание окрашивание. Этого можно достичь, размазав образец по предметному стеклу, а затем нанеся нигрозин (черный синтетический краситель) или тушь (водная суспензия частиц углерода). После высыхания микроорганизмы можно рассматривать под микроскопом в светлом поле как более светлые включения, хорошо контрастирующие с окружающей их темной средой. Отрицательно окрашивание может окрашивать фоническое, а не организмы, потому что клеточная стенка микроорганизмов обычно имеет отрицательный заряд, который отталкивает отрицательно заряженное пятно. Красители, используя при отрицательном окрашивании, кислыми. Примечание: отрицательное окрашивание - это мягкий метод, который не может уничтожить микроорганизмы, и поэтому не подходит для изучения патогенов.

Положительное окрашивание

В отличие от отрицательного окрашивания, при положительном окрашивании используютсяовые красители для окрашивания образца на ярком фоне. Хотя хромофор используется как для отрицательного окрашивания, тип хромофора, используется в этой методике, представляет собой положительно заряженный ион, а не отрицательный. Отрицательно заряженная клеточная стенка многих микроорганизмов притягивает положительно заряженный хромофор, в результате чего образец впитывает пятно, придавая ему цвет используемого красителя. Положительное окрашивание используется в микробиологии чаще, чем отрицательное. Различные типы положительного заражения ниже.

Простое окрашивание по сравнению с дифференциальным окрашиванием

Простое окрашивание - это метод, при котором на предметное стекло используется только один тип окрашивания. Используется только одно окрашивание, образцы (для отрицательных пятен) или фон (для отрицательных пятен) будут одного цвета. Поэтому простые красители обычно используются для просмотра одного организма на слайде. При дифференциальном окрашивании используется несколько красок на предметное стекло. В зависимости от используемых красителей организмы будут иметь разные цвета, что позволяет разделить несколько образцов на разные категории. Дифференциальное приветствие 1 человек, что можно увидеть в окрашивании эндоспор.

Типах методов окрашивания

Sr. №Техника окрашиванияПодготовкаПрименениеРезультат
1.Простое (монохромное)Пятно мазка одним красителем.

например. Метиленовый синий, сафранин и т. Д.

Используются для выделения микробов и иллюстративных клеточных

форм и структур.

Организмы окрашиваются в цвет нанесенного красителя
2.Негатив (рельеф)Мазок, смешанный с нигрозином и растянутый

в тонкую пленку

Изучение морфологии клетокОрганизм окрашен, фон черный
3ГраммПервичное окрашивание: кристаллический фиолетовый, нанесенный на пленку, затем обработанный йодом (протрава), спирт (обесцвечивающий агент) и контр-окрашивание сафраниномХарактеризует бактерии в одной из двух групп, грамположительные или ГраммоотрицательныйГрамположительный цвет пурпурный

Грамположительный цвет розовый

4Кислотостойкий (метод Циля-Нильсена)Пленка, окрашенная горячим ZNCF обесцвеченные (кислотно-спиртовые) и контркрашивающие метиленовым синимОтделить не обесцвеченные кислотоустойчивые бактерии, не обесцвеченные, от окрашенных окрашенных некислотостойких бактерийкислотоустойчивые бактерии: красный

Некислотно устойчивый: синий

5эндоспор (Дорнора)Первичное Малахитивание нагрев фиксируется для проникновения спор; Вегетативные клетки контрастируют с сафранином. Обнаруживает обнаруживает эндоспор у шести родов бактерийЭндоспоры: зеленые

Вегетативные клетки: красные

6Капсула

A: метод Хисса (Положительный метод)

B: Метод Маневальса (отрицательный)

Мазок, окрашенный красителем Хисса после обработки сульфатом меди

Бактериальная суспензия, смазанная вместе с конго красным нанесенная окраска Маневаля

Капсулы могут присутствовать как прозрачные зоны, окружающие клетки капсулированных бактерий, и используются для демонстрации капсул.Капсула: светло-фиолетовый / бледно-лиловый цвет

Бактерии: фиолетовая капсула, бактериальная клетка, выделяется на темном фоне

7Клеточная стенка (метод Дьяра)Мазок, обработанный C.P.C. который диссоциирует с образованием положительно заряженного цетилпиридиния и отрицательно заряженных хлорида. Положительно заряженные ионы адсорбируются на отрицательно заряженной клеточной стенкеОкрашивают клеточную стенку бактерииКлеточная стенка: Красная Цитоплазма: Синий
8Жгутик (метод Лейфсона)Протравливающее действие для утолщения жгутиков перед окрашиванием и микроскопического увеличения видимости при окрашивании красителем наличие ЛейфсонаДемонстрирует жгутиковЖгутики: красные Вегетативные клетки: синие
9Ядерный материал (метод Фельгена)Мазок обрабатывают для гидролиза, чтобы высвободить пурины из ДНК, пурины, чтобы вызвать сдвиг фуранозы в альдегид. Альдегидные группы могут реагировать с реактивом Шиффа с образованием аддитивных соединений.Чтобы обнаружить присутствие ДНК в клетке. Но для обнаружения ДНК РНК должна быть избирательно разрушена кислотным гидролизом, не исследованная ДНКЯдерный материал - розовато-фиолетовый,

Цитоплазма - бесцветная

10Метахроматические гранулы (Альберта) метод)Мазок сначала обрабатывают хлороформом для удаления жиров. Мазок, нанесенный красителем Альберта, который содержит катионные красители, такие как толуидиновый синий и малахитовый зеленый. Толуидиновый синий предпочтительно окрашивает гранулы, в то время как малахитовый зеленый окрашивает цитоплазму.Гранулы демонстрируют типичную природу монохроматизма, это используется для демонстрации гранулГранулы: голубовато-черный, цитоплазма: зеленый
11Внутриклеточные липиды (методдона)Липиды окрашиваются жирорастворимыми красителями, такими как суданский черный. При нанесении суданского черного B красители переходят в липиды и удерживаются там, в то время как цитоплазма контрастно окрашивается сафранином.Для определения наличия липидов в клеточной стенке, клеточной мембране или жировых глобулах (ПОБ в цитоплазме)Липидные гранулы: темно-синий,

Цитоплазма: светло-розовый

12Полисахарид (метод Хотча-Кусса)Полисахарид окисляется периодатом с образованием полиальдегида, который реагирует с реагентами Шиффа до красного цвета, в то время как цитоплазма встречно окрашивается малахитовым зеленымОбнаруживает накопление гранул полисахарида в клеткахПолисахарид: Красный

Цитоплазма: Зеленый

Специальные методы

Окрашивание по Граму

Окрашивание по Граму используется для определения грамм-статуса широкая классификация бактерий на основе состава их клеточной стенки. При окрашивании по Граму используется кристаллический фиолетовый для окрашивания клеточных стенок, йод (в качестве протравы) и фуксин или сафранин, контрастирующий с (отметка все бактерии). Статус по Граму помогает разделить образцы бактерий на две группы, обычно представляющие их филогенез. Эта характеристика в сочетании с другими методами делает его полезным инструментом в лабораториях клинической микробиологии, где он может быть важным при раннем выборе подходящих антибиотиков.

На большинстве препаратов, окрашенных по Граму, грамотрицательных Организмы кажутся красными или розовыми из-за контраста. Из-за более высокого содержания липидов после обработки спиртом пористость клеточной стенки увеличивается, следовательно, комплекс CVI (кристаллический фиолетовый - йод) может проходить через нее. Таким образом, основное пятно не сохраняется. Кроме того, в отличие от большинства грамположительных бактерий, грамотрицательные бактерии имеют только несколько слоев пептидогликана и вторичную клеточную мембрану, состоящую в основном из липополисахарида.

Окрашивание эндоспор

Окрашивание эндоспор используется для определения наличия или отсутствия эндоспор, которые очень затрудняют уничтожение бактерий. Доказано, что споры бактерий трудно окрашивать, поскольку они не проницаемы для водных красителей. Окрашивание эндоспор особенно полезно для идентификации образующих эндоспоры бактериальных патогенов, таких как Clostridium difficile. До разработки более эффективных методов это окрашивание выполняли по методу Виртца с термофиксацией и контрастным окрашиванием. Благодаря использованию малахитового зеленого и разбавленного соотношения карбол-фуксина фиксация бактерий в осмиевой кислоте была отличным способом избежать смешивания красителей. Однако недавно пересмотренные методы окрашивания значительно сократили время, необходимое для создания этих пятен. Этот пересмотр включал замену карбол-фуксина водным сафранином в сочетании с недавно разбавленной 5% формулой малахитового зеленого. Этот новый и улучшенный состав пятен был выполнен таким же образом, как и раньше, с использованием термофиксации, полоскания и промокания для последующего исследования. При обследовании все бактерии, образующие эндоспоры, будут окрашены в зеленый цвет, а все остальные клетки станут красными.

Краситель Циля-Нильсена

A Краситель Циля-Нильсена - кислотоупорный краситель, используемый для окрашивания видов Mycobacterium tuberculosis, которые не окрашиваются стандартными лабораторными процедурами окрашивания, такими как как окрашивание по Граму.

Это окрашивание выполняется с помощью окрашивания как красного карбол-фуксина, окрашивающего бактерии, так и контркрашивания, такого как метиленовый синий.

окрашивание гематоксилином и эозином (HE)

Изображение под микроскопом гистологического образца ткани человеческого легкого, окрашенного гематоксилином и эозином.

Окрашивание гематоксилином и эозином часто используется в гистология для исследования тонких срезов тканей. гематоксилин окрашивает ядра клеток в синий цвет, а эозин окрашивает цитоплазму, соединительную ткань и другие внеклеточные вещества в розовый или красный цвет. Эозин сильно поглощается эритроцитами, окрашивая их в ярко-красный цвет. В искусно приготовленном препарате HE красные кровяные тельца почти оранжевые, а коллаген и цитоплазма (особенно мышечная) приобретают разные оттенки розового.

Окрашивание по Папаниколау

Окрашивание по Папаниколау, или окрашивание по Папаниколау, было разработано для замены тонкоигольной аспирационной цитологии (FNAC) в надежде сократить время и стоимость окрашивания без ущерба для качества. Это окрашивание - часто используемый метод для исследования образцов клеток из различных типов тканей в различных органах. Окрашивание PAP претерпело несколько изменений, чтобы стать «подходящей альтернативой» FNAC. Этот переход произошел из-за того, что ученые оценили влажные фиксированные мазки, сохраняющие структуру ядер, в отличие от непрозрачного внешнего вида высушенных на воздухе мазков Романовского. Это привело к созданию гибридного окрашивания влажной фиксации и воздушной сушки, известного как сверхбыстрое окрашивание папаниколау. Эта модификация включает использование физиологического раствора для регидратации клеток с целью увеличения прозрачности клеток и использование спиртового формалина для улучшения цвета ядер. Окрашивание по папаниколау теперь используется вместо цитологического окрашивания во всех типах органов из-за его повышения морфологического качества, уменьшения времени окрашивания и снижения стоимости. Его часто используют для окрашивания мазков Папаниколау. Он использует комбинацию гематоксилина, оранжевого G, эозина Y, светло-зеленого SF желтоватого и иногда коричневого бисмарка Y.

PAS-окрашивание

PAS-диастаза, показывающее грибок Histoplasma.

Periodic acid-Schiff - это специальное гистологическое окрашивание, используемое для маркировки углеводов (гликоген, гликопротеин, протеогликаны ). PAS обычно используется на тканях печени, где образуются отложения гликогена, что делается для того, чтобы различать различные типы болезней накопления гликогена. PAS важен, потому что он может обнаруживать гранулы гликогена, обнаруженные в опухолях яичников и поджелудочной железы эндокринной системы, а также в мочевом пузыре и почках почечной системы. Базальные мембраны также могут отображаться при окрашивании PAS и могут быть важны при диагностике заболевания почек. Из-за большого количества углеводов в клеточной стенке гиф и дрожжевых форм грибов окрашивание Периодной кислотой по Шиффу может помочь найти эти виды в образцах тканей человеческого тела.

Трихром Массона

Трихром Массона является (как следует из названия) протоколом трехцветного окрашивания. Рецепт развился из оригинальной техники Массона для различных конкретных применений, но все они хорошо подходят для различения клеток от окружающей соединительной ткани. Большинство рецептов производят красный кератин и мышечные волокна, синее или зеленое окрашивание коллагена и кости, светло-красное или розовое окрашивание цитоплазмы, и черные ядра клеток.

окрашивание по Романовскому

окрашивание по Романовскому считается эффектом полихромного окрашивания и основано на комбинации эозина плюс (химически восстановлено эозин ) и деметилированный метиленовый синий (содержащий продукты его окисления лазурь A и). Это окрашивание проявляет различные цвета для всех клеточных структур («эффект Романовского-Гимзы») и поэтому использовалось для окрашивания полиморфов нейтрофилов и ядер клеток. Распространенные варианты включают пятно Райта, пятно Дженнера, пятно Мая-Грюнвальда, пятно Лейшмана и пятно Гимзы.

. Все они используются для исследования образцы крови или костного мозга. Они предпочтительнее HE для исследования клеток крови, потому что можно легко различить различные типы лейкоцитов (лейкоцитов). Все они также подходят для исследования крови для выявления передающихся через кровь паразитов, таких как малярия.

окрашивание серебром

окрашивание серебром метенамином по Гемори, демонстрирующее гистоплазму (показано черным) <. 443>Окрашивание серебром - это использование серебра для окрашивания гистологических срезов. Этот вид окрашивания важен для демонстрации белков (например, типа III коллагена ) и ДНК. Он используется для отображения веществ внутри и снаружи ячеек. Окрашивание серебром также используется в гель-электрофорезе в градиенте температуры.

Аргентаффинные клетки восстанавливают раствор серебра до металлического серебра после фиксации формалином . Этот метод был открыт итальянцем Камилло Гольджи с помощью реакции между нитратом серебра и дихроматом калия, таким образом осаждая хромат серебра в некоторых ячейках (см. Метод Гольджи ). Аргирофильные клетки восстанавливают раствор серебра до металлического серебра после воздействия красителя, содержащего восстановитель. Примером этого может быть гидрохинон или формалин.

Окрашивание суданом

Окрашивание суданом использует судановые красители для окрашивания суданофильных веществ, часто включая липиды. Судан III, Судан IV, Oil Red O, четырехокись осмия и Sudan Black B.. Окрашивание суданом часто используется для определения уровня фекального жира при диагностике стеатореи.

окрашивание Виртца-Конклина

Окрашивание Виртца-Конклина - это специальный метод, разработанный для истинного окрашивания. эндоспоры с использованием красителя малахитовый зеленый в качестве основного красителя и сафранина в качестве контрастного красителя. После окрашивания они не обесцвечиваются. Добавление тепла во время процесса окрашивания является огромным фактором. Тепло помогает открыть мембрану спор, чтобы краситель мог проникнуть внутрь. Основная цель этого красителя - показать прорастание спор бактерий. Если идет процесс прорастания, то спора станет зеленой из-за малахитового зеленого цвета, а окружающая клетка станет красной из-за сафранина. Это окрашивание также может помочь определить ориентацию спор внутри бактериальной клетки; будь то терминал (на кончике), субтерминальный (внутри ячейки) или центральный (полностью в середине ячейки).

Окрашивание гибридизирующим пептидом коллагена

Окрашивание гибридизирующим пептидом коллагена (CHP) позволяет легко и напрямую окрашивать денатурированные коллагены любого типа (тип I, II, IV и т. Д.) Независимо от того, они были повреждены или разложены ферментативными, механическими, химическими или термическими способами. Они работают, свертываясь в тройную спираль коллагена с доступными одиночными нитями в ткани. КГП можно визуализировать с помощью простого флуоресцентного микроскопа.

Обычные биологические пятна

Различные пятна реагируют или концентрируются в разных частях клетки или ткани, и эти свойства используются с пользой для выявления определенных частей или области. Некоторые из наиболее распространенных биологических пятен перечислены ниже. Если не указано иное, все эти красители можно использовать с фиксированными клетками и тканями; отмечены витальные красители (пригодные для использования с живыми организмами).

Акридиновый оранжевый

Акридиновый оранжевый (АО) представляет собой селективный флуоресцентный катионный краситель, избирательный к нуклеиновым кислотам, пригодный для определения клеточного цикла. Он проницаем для клеток и взаимодействует с ДНК и РНК посредством интеркаляции или электростатического притяжения. Когда он связан с ДНК, он очень похож по спектру на флуоресцеин. Подобно флуоресцеину, он также может применяться в качестве неспецифического красителя для подсветки традиционно окрашенных клеток на поверхности твердого образца ткани (окрашивание с подсветкой флуоресценцией).

Коричневый Бисмарк

Коричневый Бисмарк (также Бисмарк коричневый Y или Манчестерский коричневый) придает желтый цвет кислотным муцинам. и интенсивный коричневый цвет тучных клеток. Одно из значений этого пятна по умолчанию состоит в том, что оно скрывает любую окружающую его структуру и снижает качество контраста. Чтобы оно было полезным, его нужно сочетать с другими пятнами. Некоторыми дополнительными красителями, используемыми вместе с коричневым Бисмарком, являются гематоксилин и толуидиновый синий, которые обеспечивают лучший контраст в гистологическом образце.

Кармин

Кармин Окрашивание паразитических плоских червей.

Кармин - ярко-красный краситель, используемый для окрашивания гликогена, в то время как карминовые квасцы представляют собой ядерное пятно. Окрашивание кармином требует использования протравы, обычно алюминий.

кумасси синий

кумасси синий (также бриллиантовый синий), неспецифически окрашивающий белки в ярко-синий цвет. Его часто используют в гель-электрофорезе.

Крезиловый фиолетовый

Крезиловый фиолетовый окрашивает кислотные компоненты цитоплазмы нейронов в фиолетовый цвет, особенно тельца nissl. Часто используется в исследованиях мозга.

Кристаллический фиолетовый

Кристаллический фиолетовый в сочетании с подходящей протравой окрашивает клеточные стенки в фиолетовый цвет. Кристаллический фиолетовый - это краситель, используемый при окрашивании по Граму.

DAPI

DAPI представляет собой флуоресцентный ядерный краситель, возбуждаемый ультрафиолетовым светом и демонстрирующий сильную синюю флуоресценцию при связывании с ДНК. DAPI связывается с A = T-богатыми повторами хромосом. DAPI также не виден при обычной просвечивающей микроскопии. Его можно использовать в живых или фиксированных клетках. Клетки, окрашенные DAPI, особенно подходят для подсчета клеток.

Эозин

Эозин чаще всего используется в качестве контрастного красителя гематоксилину, придавая цитоплазматическому материалу розовый или красный цвет, клеточные мембраны и некоторые внеклеточные структуры. Он также придает сильный красный цвет эритроцитам. Эозин также может использоваться в качестве контрастного красителя в некоторых вариантах окрашивания по Граму и во многих других протоколах. На самом деле существует два очень близких соединения, обычно называемых эозином. Чаще всего используется эозин Y (также известный как эозин Y ws или эозин желтоватого цвета); он имеет слегка желтоватый оттенок. Другое соединение эозина - это эозин B (эозин голубоватый или имперский красный); у него очень слабый голубоватый оттенок. Эти два красителя взаимозаменяемы, и использование того или другого является скорее вопросом предпочтений и традиций.

Бромид этидия

Бромид этидия интеркалирует и окрашивает ДНК, обеспечивая флуоресцентное красно-оранжевое окрашивание. Хотя он не окрашивает здоровые клетки, его можно использовать для идентификации клеток, которые находятся на последних стадиях апоптоза - такие клетки имеют гораздо более проницаемые мембраны. Следовательно, бромистый этидий часто используется в качестве маркера апоптоза в популяциях клеток и для определения местоположения полос ДНК при гель-электрофорезе. Краситель также можно использовать в сочетании с акридиновым оранжевым (АО) при подсчете жизнеспособных клеток. Это комбинированное окрашивание EB / AO заставляет живые клетки флуоресцировать зеленым, в то время как апоптозные клетки сохраняют характерную красно-оранжевую флуоресценцию.

Кислый фуксин

Кислотный фуксин можно использовать для окрашивания коллагена, гладких мышц или митохондрий. Кислотный фуксин используется в качестве окраски ядер и цитоплазмы в методе трихрома Мэллори. Кислый фуксин окрашивает цитоплазму в некоторых вариантах трихрома Массона. In Van Gieson's picro-fuchsine, acid fuchsin imparts its red colour to collagen fibres. Acid fuchsin is also a traditional stain for mitochondria (Altmann's method).

Haematoxylin

Haematoxylin (hematoxylin in North America) is a nuclear stain. Used with a mordant, haematoxylin stains nuclei blue-violet or brown. It is most often used with eosin in the HE stain (haematoxylin and eosin) staining, one of the most common procedures in histology.

Hoechst stains

Hoechst is a bis-benzimidazole derivative compound that binds to the minor groove of DNA. Often used in fluorescence microscopy for DNA staining, Hoechst stains appear yellow when dissolved in aqueous solutions and emit blue light under UV excit действие. Существует два основных типа Hoechst : Hoechst 33258 и Hoechst 33342. Эти два соединения функционально схожи, но имеют небольшую разницу в структуре. Hoechst 33258 содержит концевую гидроксильную группу и, таким образом, более растворим в водном растворе, однако эти характеристики снижают его способность проникать через плазматическую мембрану. Hoechst 33342 содержит этил замещение в концевой гидроксильной группе (т. Е. Этиловую эфирную группу), что делает ее более гидрофобной для облегчения прохождения через плазматическую мембрану

Йод

Йод используется в химия как индикатор для крахмала. Когда крахмал смешивается с йодом в растворе, появляется интенсивный темно-синий цвет, представляющий комплекс крахмал / йод. Крахмал - это вещество, обычное для большинства растительных клеток, поэтому слабый раствор йода окрашивает крахмал, присутствующий в клетках. Йод является одним из компонентов метода окрашивания, известного как окрашивание по Граму, используемого в микробиологии. Используемый в качестве протравы при окрашивании по Граму, йод усиливает проникновение красителя через поры, присутствующие в клеточной стенке / мембране.

Раствор Люголя или йод Люголя (IKI) представляет собой коричневый раствор, который становится черным в присутствии крахмалов и может использоваться в качестве окрашивания клеток, делая ядра ядер более заметными.

Раствор Люголя, применяемый с обычным уксусом (уксусной кислотой), используется для выявления предраковых и раковых изменений в тканях шейки матки и влагалища во время последующих исследований «Пап-мазок» при подготовке к биопсии.. Уксусная кислота заставляет аномальные клетки бледнеть, в то время как нормальные ткани окрашивают йод в коричневый цвет красного дерева.

Малахитовый зеленый

Малахитовый зеленый (также известный как ромбовидный зеленый B или викторианский зеленый B) можно использовать в качестве сине-зеленого контрастного вещества к сафранину в методике окрашивания по Гименесу для бактерий. Его также можно использовать для прямого окрашивания спор.

Метиловый зеленый

Метиловый зеленый обычно используется в светлопольных микроскопах, а также в флуоресцентных микроскопах для окрашивания хроматина клеток, чтобы их было легче просмотрено.

Метиленовый синий

Метиленовый синий используется для окрашивания клеток животных, таких как клетки щек человека, чтобы сделать их ядра более заметными. Также используется для окрашивания мазков крови в цитологии.

Нейтральный красный

Нейтральный красный (или толуиленовый красный) окрашивает вещество Ниссля красный. Обычно его используют в качестве контрастного красителя в сочетании с другими красителями.

Нильский синий

Нильский синий (или Нильский синий A) окрашивает ядра синим. Его можно использовать с живыми клетками.

Нильский красный

Нильский красный (также известный как оксазон нильского синего) образуется при кипячении нильского синего с серной кислотой. Это дает смесь нильского красного и нильского синего. Нильский красный - это липофильное пятно; он будет накапливаться в липидных глобулах внутри клеток, окрашивая их в красный цвет. Нильский красный можно использовать с живыми клетками. Он сильно флуоресцирует при разделении на липиды, но практически не светится в водном растворе.

Тетраоксид осмия (официальное название: тетраоксид осмия)

Тетраоксид осмия используется в оптической микроскопии для окрашивания липидов. Он растворяется в жирах и восстанавливается органическими веществами до элементарного осмия, легко видимого черного вещества.

Иодид пропидия

Иодид пропидия представляет собой флуоресцентный интеркалирующий агент, который можно использовать окрашивать клетки. Иодид пропидия используется в качестве тестирования ДНК в тестовой цитометрии для оценки жизнеспособности клеток или ДНК в тестировании клеточного цикла или в микроскопии для визуализации ядра ДНК-ДНК-органелл. Йодид пропидия не может проникать через мембрану живых клеток, что делает его полезным для дифференциации некротических, апоптотических и здоровых клеток. PI также связывается с РНК, что требует обработки нуклеазами для различения окрашивания РНК и ДНК

Родамин

Родамин представляет собой белок-специфический флуоресцентный краситель, обычно используемый в флуоресцентной микроскопии.

Сафранин

Сафранин (или Сафранин О) - красный катионный краситель. Он связывается с ядрами (ДНК) и другими тканевыми полианионами, включая гликозаминогликаны в хрящевых и тучных клетках, а также с компонентами лигнина и пластид в тканях растений. Сафранин не следует путать с шафраном, дорогим натуральным красителем, который используется в некоторых методах для придания коллагену желтого цвета, чтобы контрастировать с синим и красными цветами, которые другие красители придают ядрам и цитоплазме в тканях животных (включая человека).

Часто используется неправильное написание «сафранин». Окончание -ин подходит для сафранина О, потому что этот краситель является амином,

Устойчивость тканей

Ткани, впитывающие пятна, называются хроматическими . Хромосомы были названы так из-за их способности поглощать фиолетовое пятно.

Положительное сродство к конкретному красителю может быть обозначено суффиксом -фильный. Например, ткани, окрашенные лазурным пятном, могут называться азурофильными. Это также может быть использовано для более общих свойств окрашивания, таких как ацидофильный для тканей, окрашиваемых кислотными красителями (особенно эозином ), базофильным при окрашивании вызывать красителями и амфофильными при окрашивании кислотными или красителями. Напротив, хромофобные ткани не сразу поглощают окрашенный краситель.

Электронная микроскопия

Как и в световой микроскопии, в просвечивающей микроскопии для увеличения контраста можно использовать окрашивание. Обычно используются электронно-плотные соединения тяжелых металлов.

Фосфорновольфрамовая кислота

Фосфорновольфрамовая кислота является обычным красителем для вирусов, нервов, полисахаридов и другие биологические тканевые материалы. Он в основном используется в форме 0,5–2% pH, что делает его нейтральным, и в сочетании с водой образует водный раствор. Фосфорновольфрамовая кислота наполнена электронно-плотным веществом, которое окрашивает фон, окружающий образец, темным, а сам образец - светлым. Этот процесс не является нормальным положительным методом окрашивания, когда образец темный, а фон остается светлым.

Тетроксид осмия

Тетроксид осмия используется в оптической микроскопии для окрашивания липидов. Он растворяется в жирах и восстанавливается органическими веществами до элементарного осмия, легко видимого черного вещества. Это, пожалуй, самый распространенный краситель, используемый для морфологии в биологической электронной микроскопии. Он также используется для окрашивания различных полимеров с целью изучения их морфологии с помощью ПЭМ. OsO. 4очень летуч и чрезвычайно токсичен. Это сильный окислитель, так как осмий степень окисления +8. Нелетучего осмия в более низкой степени окисления.

Четырехокись рутения

Четырехокись рутения столь же летучая и более агрессивная, чем четырехокись осмия, и даже может окрашивать материалы, устойчивые к пятнам осмия, например полиэтилен.

Другие химические вещества, используемые при окрашивании с помощью электронной микроскопии, включают: молибдат аммония, йодид кадмия, карбогидразид, хлорид. железа, гексамин, трихлорид индия, ацетат свинца, цитрат свинца, нитрат свинца (II), периодическая кислота, фосфорномолибденовая кислота, феррицианид калия, ферроцианид калия, рутений красный, нитрат серебра, протеинат серебра, тиосемикарбазид, уранилацетат, уранилнитрат и ванадилсульфат.

См. Также

Ссылки

Дополнительная литература

Внешние ссылки

На Викискладе есть материалы, связанные с микроскопией Методы окрашивания.
Последняя правка сделана 2021-06-09 07:20:28
Содержание доступно по лицензии CC BY-SA 3.0 (если не указано иное).
Обратная связь: support@alphapedia.ru
Соглашение
О проекте