Гистология

редактировать
Изучение микроскопической анатомии клеток и тканей растений и животных Гистологический образец помещается на сцену световой микроскоп. Ткань легкого человека, окрашенная гематоксилином и эозином, как видно под микроскопом.

Гистология, также известная как микроскопическая анатомия или микроанатомия - это раздел биологии, изучающий микроскопическую анатомию биологических тканей. Гистология - это микроскопический аналог общей анатомии, который рассматривает более крупные структуры, видимые без микроскопа. Хотя микроскопическую анатомию можно разделить на органологию, изучение органов, гистологию, исследование тканей и цитологию, изучение клеток, в современном использовании эти темы относятся к области гистология. В медицине гистопатология - это раздел гистологии, который включает микроскопическую идентификацию и исследование пораженных тканей. В области палеонтологии термин палеогистология относится к гистологии ископаемых организмов.

Содержание
  • 1 Биологические ткани
    • 1.1 Классификация тканей животных
    • 1.2 Классификация тканей растений
  • 2 Медицинская гистология
    • 2.1 Род занятий
  • 3 Подготовка проб
    • 3.1 Фиксация
    • 3.2 Отбор и обрезка
    • 3.3 Заливка
      • 3.3.1 Парафиновый воск
      • 3.3. 2 Другие материалы
    • 3.4 Срезы
    • 3.5 Окрашивание
      • 3.5.1 Световая микроскопия
      • 3.5.2 Гисторадиография
      • 3.5.3 Иммуногистохимия
      • 3.5.4 Электронная микроскопия
    • 3.6 Специализированные методы
      • 3.6.1 Криосекционирование
      • 3.6.2 Ультрамикротомия
    • 3.7 Артефакты
  • 4 История
  • 5 Направления будущего
    • 5.1 Гистология in vivo
  • 6 Примечания
  • 7 Ссылки
Биологические ткани

Классификация тканей животных

Существует четыре основных типа тканей животных: мышечная ткань, нервная ткань, соединительная ткань и эпителиальная ткань. Все ткани животных считаются подтипами этих четырех основных типов тканей (например, кровь классифицируется как соединительная ткань, поскольку клетки крови взвешены во внеклеточном матриксе, плазме ).

Классификация тканей растений

His тологический срез стебля растения (Alliaria petiolata ).

Для растений изучение их тканей подпадает под область анатомии растения со следующими четырьмя основными типами:

Медицинская гистология

Гистопатология - это раздел гистологии, который включает микроскопическую идентификацию и исследование пораженной ткани. Это важная часть анатомической патологии и хирургической патологии, поскольку для точной диагностики рака и других заболеваний часто требуется гистопатологическое исследование образцов тканей. Квалифицированные врачи, часто имеющие лицензию патолог, проводят гистопатологическое исследование и предоставляют диагностическую информацию на основе своих наблюдений.

Профессии

Область гистологии, которая включает подготовку тканей к микроскопическому исследованию, известна как гистотехнология. Должности обученного персонала, который готовит гистологические образцы для исследования, многочисленны и включают гистотехников, гистотехнологов, техников и технологов гистологии, лаборантов-медиков и ученых-биомедиков.

пробоподготовки

Большинство гистологических образцов требует подготовки перед микроскопическим исследованием; эти методы зависят от образца и метода наблюдения.

Фиксация

Гистологический срез окаменелого беспозвоночного. ордовик мшанки.

химические фиксаторы используются для сохранения и поддержания структуры тканей и клеток; фиксация также укрепляет ткани, что помогает разрезать тонкие срезы ткани, необходимые для наблюдения под микроскопом. Фиксанты обычно сохраняют ткани (и клетки) за счет необратимого сшивания белков. Наиболее широко используемым фиксатором для световой микроскопии является 10% нейтральный буфер формалин или NBF (4% формальдегид в физиологическом растворе с фосфатным буфером ).

Для электронной микроскопии наиболее часто используется используемый фиксатор - глутаральдегид, обычно в виде 2,5% раствора в физиологическом растворе с фосфатным буфером. Другими фиксаторами, используемыми для электронной микроскопии, являются тетроксид осмия или уранилацетат.

Основное действие этих фиксаторов альдегида заключается в сшивании аминогрупп в белках посредством образования метиленовых мостиков (-CH 2 -) в в случае формальдегида или с помощью поперечных связей C 5H10в случае глутарового альдегида. Этот процесс, сохраняя структурную целостность клеток и тканей, может повредить биологическую функциональность белков, в частности ферментов.

Формалин фиксация приводит к деградации мРНК, миРНК и ДНК, а также к денатурации и модификации белков в тканях. Однако экстракция и анализ ядер кислоты и белки из фиксированных формалином, залитых парафином тканей возможны с использованием соответствующих протоколов.

Отбор и обрезка

Отбор - это выбор соответствующей ткани в тех случаях, когда нет необходимости вся исходная ткань ткани подвергается дальнейшей обработке. Остаток может остаться фиксированным на случай, если его нужно будет исследовать позже.

Обрезка - это разрезание образцов ткани, чтобы обнажить соответствующие поверхности для последующего разрезания. Он также создает образцы тканей подходящего размера для размещения в кассетах.

Вложение

Ткани заделаны в более твердую среду как в качестве опоры, так и для обеспечения возможности разрезания тонких срезов ткани. В общем, воду необходимо сначала удалить из тканей (обезвоживание) и заменить средой, которая либо непосредственно затвердевает, либо промежуточной жидкостью (очистка), которая смешивается со средой для заливки.

Парафиновый воск

Гистологический образец залит парафином (ткань удерживается на дне металлической формы, и на нее заливается больше расплавленного парафина).

Для световой микроскопии парафиновый воск является наиболее подходящим часто используемый закладной материал. Парафин не смешивается с водой, основным компонентом биологической ткани, поэтому сначала его необходимо удалить с помощью ряда этапов обезвоживания. Образцы переносят через ряд ванн с постепенно повышающейся концентрацией этанола, вплоть до 100% этанола для удаления оставшихся следов воды. За обезвоживанием следует очищающий агент (обычно ксилол, хотя используются другие безопасные для окружающей среды заменители), который удаляет спирт и смешивается с воском, наконец, для замены добавляется расплавленный парафиновый воск. ксилол и проникнуть в ткань. В большинстве гистологических или гистопатологических лабораторий обезвоживание, очистка и инфильтрация воска выполняются в тканевых процессорах, которые автоматизируют этот процесс. Пропитанные парафином ткани ориентируются в формах, заполненных воском; после установки воск охлаждается, затвердевая блок и ткань.

Другие материалы

Парафин не всегда обеспечивает достаточно твердую матрицу для резки очень тонких срезов (что особенно важно для электронных микроскопия). Парафиновый воск также может быть слишком мягким по отношению к ткани, нагрев расплавленного воска может нежелательным образом изменить ткань, или обезвоживающие или очищающие химические вещества могут повредить ткань. Альтернативы парафиновому воску включают, эпоксид, акрил, агар, желатин, целлоидин и другие типы воски.

В электронной микроскопии эпоксидные смолы являются наиболее часто применяемыми средами для заливки, но также используются акриловые смолы, особенно там, где требуется иммуногистохимия.

Для разрезания тканей в замороженном состоянии ткани помещают в заливочную среду на водной основе. Предварительно замороженные ткани помещают в формы с жидким материалом для заливки, обычно это гликоль на водной основе, OCT, TBS, криогель или смола, которые затем замораживают с образованием затвердевших блоков..

Срезы

Гистологический образец вырезается на микротоме.

Для световой микроскопии нож, установленный в микротоме, используется для разрезания срезов ткани (обычно между 5-15 микрометрами толстый), которые помещают на предметное стекло микроскопа. Для просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ) алмазный или стеклянный нож, установленный в ультрамикротоме, используется для разрезания срезов ткани толщиной 50-150 нанометров.

Окрашивание

Биологическая ткань имеет слабый естественный контраст как в световом, так и в электронном микроскопе. Окрашивание используется как для придания контрастности ткани, так и для выделения конкретных деталей, представляющих интерес. Когда краситель используется для нацеливания на конкретный химический компонент ткани (а не на общую структуру), используется термин гистохимия.

Световая микроскопия

трихром Массона Окрашивание трахеи.

гематоксилином и эозином (окрашивание HE ) крысы является одним из наиболее часто используемых красителей в гистологии для отображения общей структуры ткани.. Гематоксилин окрашивает клетки ядра в синий цвет; эозин, кислый краситель, окрашивает цитоплазму и другие ткани в разные пятна розового цвета.

В отличие от HE, который используется в качестве общего красителя, там Есть много методов, которые более избирательно окрашивают клетки, клеточные компоненты и определенные вещества. Обычно применяемый гистохимический метод, нацеленный на конкретное химическое вещество, - это реакция берлинского синего Перлза, используемая для демонстрации отложений железа при таких заболеваниях, как гемохроматоз. Метод Ниссля для субстанции Ниссля и метод Гольджи (и связанные с ним серебряные пятна ) полезны для идентификации нейронов - другие примеры более конкретных

Гисторадиография

В гисторадиографии предметное стекло (иногда окрашенное гистохимически) подвергается рентгенографии. Чаще всего авторадиография используется для визуализации мест, куда радиоактивное вещество было перенесено внутри тела, например клеток в S-фазе (подвергающихся репликации ДНК ), которые включают меченный тритием тимидин, или сайты, с которыми связываются радиоактивно меченые нуклеиновые кислоты зонды в гибридизации in situ. Для авторадиографии на микроскопическом уровне предметное стекло обычно погружают в жидкую эмульсию ядерного тракта, которая высыхает, образуя пленку экспонирования. Индивидуальные зерна серебра на пленке визуализируются с помощью микроскопии в темном поле.

Иммуногистохимии

Недавно антитела были использованы для специфической визуализации белков, углеводов и липидов. Этот процесс называется иммуногистохимией, или, когда краситель представляет собой флуоресцентную молекулу, иммунофлуоресценцию. Этот метод значительно расширил возможности определения категорий клеток под микроскопом. Другие передовые методы, такие как нерадиоактивная гибридизация in situ, могут быть объединены с иммунохимией для идентификации конкретных молекул ДНК или РНК с флуоресцентными зондами или метками, которые могут использоваться для иммунофлуоресценции и ферментно-связанной флуоресцентной амплификации (особенно щелочной фосфатазой и усиление тирамидного сигнала). Флуоресцентная микроскопия и конфокальная микроскопия используются для обнаружения флуоресцентных сигналов с хорошими внутриклеточными деталями.

Электронная микроскопия

Для электронной микроскопии тяжелые металлы обычно используются для окрашивания срезов тканей. Уранилацетат и цитрат свинца обычно используются для придания контраста к ткани в электронном микроскопе.

Специализированные методы

Криопреобразование

Подобно процедуре замороженного среза, применяемой в медицине, криосекционированию - это метод быстрого замораживания, разрезания и монтирования срезов ткани для гистологии. Срезы ткани обычно делаются на криостате или замораживающем микротоме. Замороженные срезы помещают на предметное стекло и могут быть окрашены для усиления контраста между различными тканями. Незакрепленные замороженные срезы можно использовать для исследований, требующих локализации ферментов в тканях и клетках. Фиксация ткани требуется для определенных процедур, таких как иммунофлуоресцентное окрашивание антителами. Замороженные срезы часто готовят во время хирургического удаления опухолей, чтобы обеспечить быстрое определение границ опухоли, как в хирургии Мооса, или определение злокачественности опухоли, когда опухоль обнаруживается случайно во время операции.

Ультрамикротомия

Зеленые водоросли под трансмиссионным электронным микроскопом

Ультрамикротомия - это метод подготовки очень тонких срезов для анализа просвечивающим электронным микроскопом (ТЕМ). Ткани обычно заделывают эпоксидной смолой или другой пластмассовой смолой. Очень тонкие срезы (толщиной менее 0,1 микрометра) вырезаются алмазными или стеклянными ножами на ультрамикротоме.

Артефакты

Артефакты - это структуры или особенности в ткани, которые мешают нормальному гистологическому исследованию. Артефакты влияют на гистологию, изменяя внешний вид тканей и скрывающие их структуры. Артефакты обработки ткани могут включать пигменты, образованные фиксаторами, усадку, вымывание клеточных компонентов, изменения цвета в различных типах тканей и изменения структур в ткани. Примером может служить ртутный пигмент, оставшийся после использования фиксатора Ценкера для фиксации среза. Фиксация формалином также может оставлять пигмент от коричневого до черного в кислых условиях.

История
Сантьяго Рамон-и-Кахаль в своей лаборатории.

В 17 веке итальянец Марчелло Мальпиги использовал микроскопы для изучения крошечных биологических объектов; некоторые считают его основоположником гистологии и микроскопической патологии. Мальпиги проанализировал под микроскопом несколько частей органов летучих мышей, лягушек и других животных. Изучая структуру легкого, Мальпиги заметил его перепончатые альвеолы ​​и волосовидные связи между венами и артериями, которые он назвал капиллярами. Его открытие установило, как вдыхаемый кислород попадает в кровоток и служит телу.

В 19 веке гистология была самостоятельной академической дисциплиной. Французский анатом Ксавье Биша ввел понятие ткани в анатомию в 1801 году, а термин «гистология» (немецкий : Histologie) был придуман для обозначения « исследование тканей », впервые появившейся в книге Карла Мейера в 1819 году. Биша описал двадцать одну человеческую ткань, которую можно отнести к четырем категориям, принятым в настоящее время гистологами. Использование иллюстраций в гистологии, которое Биша считал бесполезным, способствовал Жан Крювелье.

. В начале 1830-х годов Пуркин изобрел микротом с высокой точностью.

19 век. Многие методы фиксации были разработаны Адольфом Ганновером (растворы хроматов и хромовой кислоты ), Франца Шульце и Макс Шульце (осмиевая кислота ), Александр Бутлеров (формальдегид ) и Бенедикт Стиллинг (замораживание ).

Методы монтажа были разработаны Рудольфом Хайденхайном (гуммиарабик ), Саломоном Стрикером (смесь воска и масла), Эндрю Причард (жевательная резинка и isinglass ) и Эдвин Клебс (канадский бальзам ).

Нобелевская премия по физиологии и медицине 1906 года была присуждена присуждается гистологам Камилло Гольджи и Сантьяго Рамон-и-Кахал. У них были противоречивые интерпретации нервной структуры бюстгальтера. в основанных на разной интерпретации одних и тех же изображений. Рамон-и-Кахал получил приз за свою верную теорию, а Гольджи за окрашивание серебром технику, которую он изобрел, чтобы сделать это возможным.

Направления будущего

Гистология in vivo

В настоящее время существует большой интерес к разработке методов гистологии in vivo (преимущественно с использованием МРТ ), которые позволят врачам неинвазивно собирать информацию о здоровых и пораженных тканях. у живых пациентов, а не из фиксированных образцов тканей.

Примечания
Ссылки
  1. ^«Определение и значение микроанатомии». Словарь английского языка Коллинза.
  2. ^«Гистология | физиология». Британская энциклопедия. Проверено 29 октября 2018 г.
  3. ^«DefinedTerm: гистология». Определенный срок. Проверено 29.10.2018.
  4. ^Maximow, Alexander A.; Блум, Уильям (1957). Учебник гистологии (седьмое изд.). Филадельфия: W. B. Saunders Company.
  5. ^ Leeson, Thomas S.; Лисон, К. Роланд (1981). Гистология (Четвертое изд.). Компания W. B. Saunders. п. 600. ISBN 978-0721657042.
  6. ^ Медицинский словарь Стедмана (27-е изд.). Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. 2006. ISBN 978-0683400076.
  7. ^Падиан, Кевин; Ламм, Эллен-Тереза, ред. (2013). Гистология костей ископаемых четвероногих: методы продвижения, анализ и интерпретация (1-е изд.). Калифорнийский университет Press. п. 298. ISBN 978-0-520-27352-8.
  8. ^Кановилл А., Чинсами А. (2015). «Костная микроструктура стереоспондила Lydekkerina Huxleyi раскрывает стратегии адаптации к суровой среде после пермского вымирания». Анат Рек (Хобокен). 298 (7): 1237–54. doi : 10.1002 / ar.23160. PMID 25857487.
  9. ^ Росс, Майкл Х.; Павлина, Войцех (2016). Гистология: текст и атлас: взаимосвязанная клеточная и молекулярная биология (7-е изд.). Wolters Kluwer. С. 984 с. ISBN 978-1451187427.
  10. ^Розай Дж. (2007). «Почему микроскопия останется краеугольным камнем хирургической патологии». Lab Invest. 87 (5): 403–8. doi : 10.1038 / labinvest.3700551. PMID 17401434. S2CID 27399409.
  11. ^Титфорд, Майкл; Боуман, Блайт (2012). «Что может быть в будущем для гистотехнологов?». Лабораторная медицина. 43 (приложение 2): e5 – e10. doi : 10.1309 / LMXB668WDCBIAWJL. ISSN 0007-5027.
  12. ^ Бэнкрофт, Джон; Стивенс, Алан, ред. (1982). Теория и практика гистологических методов (2-е изд.). Longman Group Limited.
  13. ^ Вик, Марк Р. (2019). «Окрашивание гематоксилином и эозином при анатомической патологии - часто игнорируемый центр контроля качества в лаборатории». Семинары по диагностической патологии. 36 (5): 303–311. doi : 10.1053 / j.semdp.2019.06.003. ISSN 0740-2570. PMID 31230963.
  14. ^Weiss AT, Delcour NM, Meyer A, Klopfleisch R (июль 2011 г.). «Эффективное и экономичное извлечение геномной ДНК из фиксированных формалином и залитых парафином тканей». Ветеринарная патология. 48 (4): 834–8. DOI : 10.1177 / 0300985810380399. PMID 20817894. S2CID 34974790.
  15. ^Беннике Т.Б., Кастаньегаард К., Падурариу С., Гайхеде М., Биркелунд С., Андерсен В., Стенсбалле А. (март 2016 г.). «Сравнение протеома мгновенно замороженных образцов тканей человека с сохранением РНК позже и фиксированных формалином залитых парафином». Открытая протеомика EuPA. 10 : 9–18. doi : 10.1016 / j.euprot.2015.10.001. PMC 5988570. PMID 29900094.
  16. ^Слауи, Мохамед; Фьет, Лоуренс (2011). «Гистопатологические процедуры: от отбора проб ткани до гистопатологической оценки». Оценка безопасности лекарств. Методы молекулярной биологии. 691 . С. 69–82. DOI : 10.1007 / 978-1-60761-849-2_4. ISBN 978-1-60327-186-8. ISSN 1064-3745. PMID 20972747.
  17. ^ Drury, R.A.B.; Уоллингтон, Э. А. (1980). Гистологический метод Карлтона (5-е изд.). Издательство Оксфордского университета. п. 520. ISBN 0-19-261310-3.
  18. ^Дапсон Р.В., Горобин Р.В. (2009). «Красители с точки зрения ХХI века». Biotech Histochem. 84 (4): 135–7. doi : 10.1080 / 10520290902908802. PMID 19384743. S2CID 28563610.
  19. ^ Bracegirdle B (1977). «История гистологии: краткий обзор источников». История науки. 15 (2): 77–101. Bibcode : 1977HisSc..15... 77B. DOI : 10.1177 / 007327537701500201. S2CID 161338778.
  20. ^Мотта П.М. (1998). «Марчелло Мальпиги и основы функциональной микроанатомии». Анат Рек. 253 (1): 10–2. doi : 10.1002 / (SICI) 1097-0185 (199802) 253: 1 <10::AID-AR7>3.0.CO; 2-I. PMID 9556019.
  21. ^Адельманн Х.Б., Мальпиги М. (1966). Марчелло Мальпиги и эволюция эмбриологии. 5 . Итака, Нью-Йорк: Издательство Корнельского университета. OCLC 306783.
  22. ^Биша Х (1801). "Considérations générales". Anatomie générale appliquée à la Physiologie et à la médecine (на французском языке). Париж: Chez Brosson, Gabon et Cie, Libraires, rue Pierre-Sarrazin, no. 7, et Place de l'École de Médecine. С. cvj – cxj.
  23. ^Майер А.Ф. (1819). Ueber Histologie und eine neue Eintheilung der Gewebe des menschlichen Körpers (на немецком языке). Бонн: Адольф Маркус.
  24. ^ Бок О. (2015). «История развития гистологии до конца XIX века». Исследование. 2 : 1283. doi : 10.13070 / rs.en.2.1283 (неактивно 2020-09-01). CS1 maint: DOI неактивен с Сентябрь 2020 г. (ссылка )
  25. ^Скорее LJ (1978). Генезис рака: исследование в истории идей. Балтимор: Johns Hopkins University Press. ISBN 9780801821035. Большинство из 21 ткани Биша можно отнести к четырем категориям, общепринятым современными гистологами: эпителий, соединительная ткань, мышцы и нервы. Четыре ткани Биша подпадают под категорию эпителий. (эпидермоидная, слизистая, серозная и синовиальная); шесть под соединительной тканью (дермоидная, фиброзная, фиброзно-хрящевая, хрящевая, костная и клеточная); два под мышцами; и два под нервом - различие между нервной управляющей «животной» жизнью и нервной управление "органической" жизнью соответствует тому, что происходит между произвольной и непроизвольной нервной системой. Артерии и вены, давние источники раздора, сегодня классифицируются как совместные ткани. Абсорбенты и выдыхающие вещества (которые Биша считал открытыми сосудами) выпали или были заменены лимфатическими сосудами. Его медуллярная система не имеет аналогов среди современных тканей.
  26. ^Meli DB (2017). Визуализация болезни: искусство и история патологических иллюстраций. Чикаго: Издательство Чикагского университета.
  27. ^«Нобелевская премия по физиологии и медицине 1906 г.». NobelPrize.org.
  28. ^Доминиетто, Марко; Рудин, Маркус (2014). «Может ли магнитный резонанс обеспечить гистологию in vivo?». Границы генетики. 4 : 298. doi : 10.3389 / fgene.2013.00298. ISSN 1664-8021. PMC 3888945. PMID 24454320.
  29. ^Delnoij, Thijs; ван Суйлен, Роберт Ян; Клейтьенс, Джек П.М.; Шалла, Саймон; Беккерс, Себастьян К.А.М. (Октябрь 2009 г.). «Гистология in vivo с помощью магнитно-резонансной томографии сердечно-сосудистой системы». Европейский журнал сердца. 30 (20): 2492. doi : 10.1093 / eurheartj / ehp319. ISSN 1522-9645. PMID 19696188.
  30. ^Мост, Холли; Клэр, Стюарт (29 января 2006 г.). «МРТ высокого разрешения: гистология in vivo?». Философские труды Королевского общества B: биологические науки. 361 (1465): 137–146. doi : 10.1098 / rstb.2005.1777. ISSN 0962-8436. PMC 1626544. PMID 16553313.
  31. ^Deistung, Andreas; Шефер, Андреас; Швезер, Фердинанд; Бидерманн, Ута; Тернер, Роберт; Райхенбах, Юрген Р. (январь 2013 г.). «К гистологии in vivo: сравнение количественного картирования восприимчивости (QSM) с визуализацией по величине, фазе и R2⁎ при сверхвысокой напряженности магнитного поля». NeuroImage. 65 : 299–314. doi : 10.1016 / j.neuroimage.2012.09.055. PMID 23036448. S2CID 140122831.
  • значок Медицинский портал
Последняя правка сделана 2021-05-23 13:13:52
Содержание доступно по лицензии CC BY-SA 3.0 (если не указано иное).
Обратная связь: support@alphapedia.ru
Соглашение
О проекте