Светлопольная микроскопия

Пример светлопольной микрофотографии. На этом изображении показано поперечное сечение сосудистой ткани в стебле растения.

Светлопольная микроскопия - простейший из всех методов оптической микроскопии освещения техники. Освещение образца передается (то есть освещается снизу и наблюдается сверху) белым светом, а контраст в образце вызывается ослаблением проходящего света в плотных областях образца. Светлопольная микроскопия - это простейший из ряда методов, используемых для освещения образцов в световых микроскопах, и благодаря своей простоте он стал популярным. Типичный вид изображения, полученного при светлопольной микроскопии, представляет собой темный образец на ярком фоне, отсюда и название.

• 1 Световой путь
• 2 Характеристики
  • 2.1 Преимущества
  • 2.2 Ограничения
  • 2.3 Усовершенствования
• 3 Ссылки

Световой путь Светлопольный микроскоп чрезвычайно прост, никаких дополнительных компонентов не требуется, кроме обычной установки светового микроскопа. Таким образом, световой путь состоит из:

• просвечивающего источника света, обычно галогенной лампы в штативе микроскопа;
• a конденсорной линзы, которая фокусирует свет от источника света на образец;
• объектив объектив, который собирает свет от образца и увеличивает изображение;
• окуляры и / или камера для просмотра образца изображения.

В светлопольной микроскопии для освещения образца может использоваться критическое или келеровское освещение.

Светлопольная микроскопия обычно имеет низкий контраст с большинством биологических образцов, так как немногие из них в значительной степени поглощают свет. Окрашивание часто требуется для увеличения контраста, что не позволяет использовать его на живых клетках во многих ситуациях. Освещение в светлом поле полезно для образцов, которые имеют собственный цвет, например, хлоропластов в растительных клетках.

• Сравнение методов трансиллюминации, используемых для создания контраста в образце папиросной бумаги (1,559 мкм / пиксель)
• 

  Яркое освещение, контраст образца зависит от поглощения света в освещении образца

• 

  кросс-поляризованным светом контраст образца определяется вращением поляризованного света через образец

• 

  темнопольное освещение, контраст образца определяется светом рассеивается образцом

• 

  Фазово-контрастное освещение, контраст образца возникает из-за интерференции света с разной длиной пути через образец

Светлопольная микроскопия является стандартом световой микроскопии, и поэтому увеличение ограничено разрешающей способностью, возможной с длиной волны видимого света.

Преимущества

• Простота требуется только базовое оборудование.
• Живые клетки можно увидеть в светлопольные микроскопы.

Ограничения

• Очень низкий контраст большинства биологических материалов. mples.
• Практический предел увеличения с помощью светового микроскопа составляет около 1300X. Хотя возможно большее увеличение, становится все труднее поддерживать четкость изображения по мере увеличения увеличения.
• Низкое видимое оптическое разрешение из-за размытия не в фокусе материала.
• Образцы, которые от природы бесцветны и прозрачны, плохо видны, например многие типы клеток млекопитающих. Перед просмотром эти образцы часто приходится окрашивать. Образцы собственного цвета можно увидеть без подготовки, например наблюдение потока цитоплазмы в клетках Чара.

Улучшения

• Уменьшение или увеличение количества источника света с помощью ирисовой диафрагмы.
• Использование масляный иммерсионный объектив линза и специальное иммерсионное масло помещают на стеклянную крышку поверх образца. Иммерсионное масло имеет такое же преломление, что и стекло, и улучшает разрешение наблюдаемого образца.
• Использование методов окрашивания образцов для использования в микробиологии, таких как простые окрашивания (метиленовый синий, сафранин, кристаллический фиолетовый ) и дифференциальные пятна (отрицательные пятна, пятна жгутиков, пятна эндоспор).
• Использование цветной (обычно синий) или поляризационный фильтр на источнике света для выделения деталей, не видимых в белом свете. Использование фильтров особенно полезно для образцов минералов.

1. Advanced Light Microscopy vol. 1 Принципы и основные свойства Максимилиана Плуты, Эльзевьера (1988)
2. Advanced Light Microscopy vol. 2 Specialized Methods Максимилиана Плуты, Elsevier (1989)
3. Введение в световую микроскопию, S. Bradbury, B. Bracegirdle, BIOS Scientific Publishers (1998)
4. Microbiology: Principles and Explorations by Jacquelyn G. Блэк, John Wiley Sons, Inc. (2005)
5. Литература по микроскопии и визуализации

Примечания

1. ^Альбертс, Брюс; и другие. (2002). Молекулярная биология клетки (4-е изд.). Нью-Йорк: Наука Гарланд. ISBN 0-8153-3218-1.
2. ^«Микроскопия: типы микроскопии» (PDF). Общественный колледж Хиллсборо. Проверено 19 апреля 2017 г.