Войти
В микроскопии, отрицательное окрашивание - общепринятый метод, часто используемый в диагностической микроскопии, для контрастирования тонкого образца с оптически непрозрачным жидкость. В этой технике фон окрашивается , оставляя фактический образец нетронутым и, следовательно, видимым. Это контрастирует с положительным окрашиванием, при котором окрашивается реальный образец.
Для светлопольная микроскопия, отрицательное окрашивание обычно проводят с использованием жидкости для черных чернил, такой как нигрозин и тушь. Образец, такой как влажная бактериальная культура, нанесенная на предметное стекло, смешивают с отрицательной окраской и дают высохнуть. При просмотре в микроскоп бактериальные клетки и, возможно, их споры кажутся светлыми на темном фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водонепроницаемого маркера для нанесения отрицательного пятна.
В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность до электронов связано с атомным номером, т. Е. Числом протонов. Некоторые подходящие негативные пятна включают молибдат аммония, уранилацетат, уранилформиат, фосфорновольфрамовую кислоту, четырехокись осмия, феррицианид осмия и. Они были выбраны потому, что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются на биологическом веществе. Структуры, которые могут быть окрашены отрицательно, намного меньше тех, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь метод используется для просмотра вирусов, бактерий, бактериальных жгутиков, структур биологических мембран и белков или агрегатов белков, которые все обладают низкой способностью рассеяния электронов. Некоторые красители, такие как четырехокись осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Являясь сильными окислителями, они образуют поперечные сшивки липидов в основном за счет реакции с ненасыщенными углерод-углеродными связями и, таким образом, фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей и одновременно окрашивают их.
Выбор отрицательного окрашивания в электронная микроскопия может быть очень важной. Раннее исследование вирусов растений с использованием отрицательно окрашенных листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним пятном и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод заключался в том, что это растение страдало смешанной инфекцией двумя отдельными вирусами. Отрицательное окрашивание на уровне как светового микроскопа, так и электронного микроскопа никогда не следует проводить с инфекционными организмами, если не соблюдаются строгие меры безопасности. Отрицательное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, таким образом, не снижает вероятность заражения оператора.
Идентификация пластинчатых (le), обратных- мицеллеров (M) и обратных- шестиугольных цилиндров H-II (H) липидные фазы путем отрицательного окрашивания. Просвечивающая электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием также успешно применялась для исследования и идентификации водных липидных агрегатов, таких как ламеллярные липосомы (le), обращенные сферические мицеллы (M) и обращенные гексагональные цилиндрические (H) фазы HII (см. рисунок).
