Пятно Лейшмана

редактировать
Пятно Лейшмана, показывающее шизонтальную стадию Pla smodium vivax malaria parasite

пятно Лейшмана, также известное как пятно Лейшмана, используется в микроскопии для окрашивания мазков крови. Обычно он используется для дифференциации и идентификации лейкоцитов, малярийных паразитов и трипаносом. Он основан на метанольной смеси «полихромированного» метиленового синего (т. Е. Деметилированного в различные азуры) и эозина. Базовый раствор в метаноле стабилен и также служит для непосредственной фиксации мазка без предварительного этапа. Если рабочий раствор приготовить путем разбавления водным буфером, полученная смесь очень нестабильна и не может использоваться долго. Пятно Лейшмана названо в честь его изобретателя, шотландского патолога Уильяма Буг Лейшмана. Это версия окраски по Романовскому, поэтому она аналогична окраске Гимзы, окраске Дженнера и Райту <98 и частично заменяется ею.>Содержание

Подготовка и хранение

Многие компании продают Leishman Краситель в виде сухого порошка, который позже восстанавливается метанолом. Тепло и яркий свет окисляют пятно и вызывают выпадение нерастворимых осадков, таких как (Бернтсен) или соли эозината лазурь.

Преимущества и недостатки

Преимущества

Согласно учебнику сэра Джона Вивиана Дейси «Практическая гематология», «Среди используемых в настоящее время красителей по Романовскому наиболее простыми являются пятна Дженнера и наиболее сложные по Гимзе. Пятно Лейшмана занимает промежуточное положение. до сих пор широко используется в рутинном окрашивании ".

В протоколе ВОЗ упоминается:

Существует ряд различных комбинаций этих красителей, которые различаются по своим характеристикам окрашивания. Май-Грюнвальд-Гимза - хороший метод для повседневной работы. Окрашивание Райта - более простой метод, в то время как Окрашивание Лейшмана также является простым методом, который особенно подходит, когда срочно требуется получить окрашенный мазок крови или обычное окрашивание недоступно (например, ночью). Окрашивание Филда - это быстрое окрашивание, используемое в основном на тонких пленках для малярийных паразитов. Какой бы метод не использовался, важно выбирать красители, не загрязненные другими красителями или солями металлов.

Сэр Уильям Буг Лейшман из Лондона и Германии независимо открыл в 1901 году то, что считается «возможно, наиболее практичными модификациями». пятна Малаховского "Они переняли лучшие аспекты красок, разработанных Малаховски и Дженнером, т.е. они использовали оба полихромированного метиленового синего (случайно сделанное Романовским, получившим название, систематически сделанное еще до Романовского, и вновь открытое, но неизвестное для Дженнер, Мэй, Грюнвальд и многие другие, использовавшие простой метиленовый синий), фильтрация осадка лазурного эозината из водной смеси и повторное растворение в спиртовом растворителе (мудрость Дженнера). Различия между методами Лейшмана и Рейтера заключались в следующем: Лейшман использовал метанол (как и Дженнер) и заменил эозин B на эозин Y, тогда как Рейтер использовал этиловый спирт и справедливо подчеркнул важность использования абсолютно чистого растворителя. Оба метода дали стойкое пятно желаемого пурпурного цвета.

Хороший контраст

Окрашивание Лейшмана обычно показывает ярко-фиолетовый цвет ядра и гранул нейтрофилов, для которых становится удобнее дифференциальный подсчет и качество окрашивания лучше, чем при окрашивании простым метиленовым синим и на основе эозина, который не создает достаточного контраста между цитоплазмой и ядром. Поскольку лейшман, как и другие красители по Романовскому, окрашивает детали цитоплазмы и гранулы, гематологи обычно предпочитают их лучше (однако о цитологах см. Ниже). По сравнению с дорогостоящими и токсичными чистыми синтетическими реагентами на основе AZure B и Eosin Y, используемыми эталонными методами ICSH, которые также не лишены недостатка, заключающегося в том, что они окисляются и в конечном итоге дают серый тон вместо оптимального синего цвета для цитоплазмы, Leishman является дешевым легкодоступная и простая в использовании техника, дающая довольно приемлемый контраст.

Хорошая чувствительность к малярийным паразитам

Было документально подтверждено, что окрашивание по Лейшману более чувствительно, чем окрашивание по Филду, и не хуже флуоресцентных красителей для обнаружения малярийных паразитов.

Недостатки

Трудности с контролем молярного соотношения

Состав полихромированного метиленового синего, смешанного с эозином, никогда не бывает так хорош, как непосредственно взвешенные и смешанные пропорции в красителях типа Гимза. Альберт Плен в 1890 году выяснил, что молярное соотношение основных и кислотных красителей должно быть увеличено с 2: 1 до 3: 1, однако со времен Дженнерса (1899 г.) использование кристаллов лазурного эозината вернуло это соотношение к неудовлетворительному. 2: 1 и глубина цвета стала меньше. Только работа Густава Гимза и ему подобных, снова вручную контролировала пропорцию этих двух компонентов, что вернуло глубину окрашивания. Однако Гимза и другие, кто искусственно контролировал пропорцию, иногда доходили до другой крайности (большой молярный избыток лазурного до соотношения 16,1), что, вероятно, было ненужным. на ICSH оптимальное соотношение составляет от 6,5 до 7,3.

Нестабильность

Окраска Лейшмана при восстановлении буфером становится очень нестабильной (в отличие от окраски Гимза, которая относительно более стабильна благодаря глицерину или ICSH). эталонные красители, в которых используется метанол + ДМСО в соотношении 6: 4 по объему) и начинает осаждаться и требует повторной фильтрации. При отсутствии тщательного контроля водопоглощение, испарение метанола из открытого контейнера и повторная фильтрация изменяют состав и требуют частой смены, что делает этот метод расточительным. Если не отфильтровать, осадок на мазке можно принять за тромбоциты. Важно не встряхивать флакон с красителем перед использованием, иначе осевший осадок будет ресуспендирован и осядет на пленке во время окрашивания, что вызовет многочисленные артефакты и затруднит микроскопию.

Цитоплазматический контраст хороший, но ядерный контраст не такой хороший, как HE

Как и все другие методы Малаховского-Романовского-Гимзы, он исчезает со временем и не может быть стабильно сохранен в течение длительного времени. Кроме того, его аналоги, представленные выше, окрашивают ядра в темно-фиолетовый цвет, и детали ядерных свойств не так ясны, как гематоксилен и эозин, которые, таким образом, предпочитают некоторые цитопатологи. Но в этом случае это дополнительный метод (поскольку он окрашивает детали цитоплазмы, гранулы и т. Д. Лучше, чем окрашивание HE ).

Ссылки

.

Последняя правка сделана 2021-05-26 05:51:26
Содержание доступно по лицензии CC BY-SA 3.0 (если не указано иное).
Обратная связь: support@alphapedia.ru
Соглашение
О проекте