Колориметрический анализ

Колориметрический анализ - это метод определения концентрации химического вещества элемент или химическое соединение в растворе с помощью цветного реагента . Он применим как к органическим соединениям, так и к неорганическим соединениям и может использоваться как с ферментативной стадией, так и без нее. Метод широко используется в медицинских лабораториях и в промышленных целях, например. анализ проб воды в связи с очисткой промышленной воды.

• 1 Оборудование
• 2 Неферментативные методы
  • 2.1 Примеры
• 3 Ферментативные методы
  • 3.1 Примеры
• 4 Ультрафиолетовые методы
  • 4.1 Примеры
• 5 См. Также
• 6 Ссылки

Требуемое оборудование: колориметр, несколько кювет и подходящий цветовой реагент. Процесс может быть автоматизирован, например с помощью AutoAnalyzer или анализа впрыска потока. Недавно колориметрические анализы, разработанные для колориметров, были адаптированы для использования с планшетными ридерами, чтобы ускорить анализ и уменьшить поток отходов.

Примеры

Кальций

Кальций + о-крезолфталеиновый комплексон ---->цветной комплекс

Медь

Медь + батокупроин дисульфонат ---->цветной комплекс

Креатинин

Креатинин + пикрат ---->окрашенный комплекс

Железо

Железо + дисульфонат батофенантролина --->окрашенный комплекс

Фосфат (неорганический)

Фосфат + молибдат аммония + аскорбиновая кислота ---->комплекс синего цвета

В ферментативном анализе (который широко используется в медицинских лабораториях ) цветной реакции предшествует реакция , катализируемая с помощью фермента. Поскольку фермент специфичен для определенного субстрата, можно получить более точные результаты. Ферментативный анализ всегда проводят в буферном растворе при определенной температуре (обычно 37 ° C), чтобы обеспечить оптимальные условия для действия ферментов. Примеры приведены ниже.

Примеры

Холестерин (метод CHOD-PAP)

1. Холестерин + кислород - (фермент холестериноксидаза ) ->холестенон + пероксид водорода
2. пероксид водорода + 4- аминофеназон + фенол - (фермент пероксидаза ) ->окрашенный комплекс + вода

Глюкоза (метод GOD-Perid)

1. глюкоза + кислород + вода - (фермент глюкозооксидаза ) ->глюконат + перекись водорода
2. Пероксид водорода + ABTS - (фермент пероксидаза ) ->окрашенный комплекс

В этом случае обе стадии реакции катализируются ферментами.

Триглицериды (метод GPO-PAP)

1. Триглицериды + вода - (фермент эстераза )-->глицерин + карбоновая кислота
2. Глицерин + АТФ - (фермент глицеринкиназа ) ->глицерин-3-фосфат + АДФ
3. Глицерин-3-фосфат + кислород - (фермент глицерин-3-фосфатоксидаза ) ->дигидроксиацетонфосфат + пероксид водорода
4. пероксид водорода + 4- аминофеназон + 4- хлорфенол - (фермент пероксидаза ) ->окрашенный комплекс

Мочевина

1. Мочевина + вода - (фермент уреаза ) ->карбонат аммония
2. Карбонат аммония + фенол + гипохлорит ---->окрашенный комплекс

В этом случае только первая стадия реакции катализируется фермент. Вторая стадия - неферментативная.

Сокращения

• CHOD = холестериноксидаза
• GOD = глюкозооксидаза
• GPO = глицерин-3-фосфатоксидаза
• PAP = фенол + аминофеназон (в некоторых методах фенол заменен на 4-хлорфенол, который менее токсичен)
• Перид = пероксидаза

В ультрафиолет (УФ) методов нет видимого изменения цвета, но принцип тот же самый, т.е. измерение изменения оптической плотности раствора. УФ-методами обычно измеряют разницу в оптической плотности при длине волны 340 нм между никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) и его восстановленной формой (НАДН).

Примеры

Пируват

Пируват + НАДН - (фермент лактатдегидрогеназа ) ->L-лактат + НАД

• анализ уровня сахара в крови
• MBAS, анализ, который указывает на анионные поверхностно-активные вещества в воде с реакцией посинения.
• Цилиндр Несслера