Войти
Клетки СНО, прикрепленные к поверхности, наблюдаемые под фазово-контрастной микроскопией яичник китайского хомячка (СНО ) клетки являются эпителиальными линия клеток, полученная из яичника китайского хомяка, часто используется в биологических и медицинских исследованиях и коммерчески при производстве терапевтических белков. Они нашли широкое применение в исследованиях генетики, скрининга токсичности, питания и экспрессии генов, особенно для экспрессии рекомбинантных белков. Клетки СНО являются наиболее часто используемыми хозяевами млекопитающих для промышленного производства терапевтических рекомбинантных белков.
Китайские хомяки использовались в исследованиях с 1919 года, где их использовали вместо мышей для набора пневмококков. Впоследствии было обнаружено, что они являются отличными переносчиками кала-азара (висцеральный лейшманиоз ), облегчая исследование Leishmania.
В 1948 году китайский хомяк был впервые использован в Соединенных Штатах для разведения в исследовательских лабораториях. В 1957 году Теодор Т. Пак получил самку китайского хомяка из лаборатории доктора Джорджа Ерганиана в Бостонском фонде исследований рака и использовал ее для получения исходной линии клеток яичника китайского хомячка (СНО). С тех пор клетки CHO стали предпочтительной линией клеток из-за их быстрого роста в суспензионной культуре и высокой продукции белка.
Имея очень низкое число хромосом (2n = 22) для млекопитающее, китайский хомяк также является хорошей моделью для радиационной цитогенетики и культуры ткани.
Все линии клеток СНО испытывают дефицит пролина синтез. Кроме того, клетки СНО не экспрессируют рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), что делает их идеальными для исследования различных мутаций EGFR.
Начиная с оригинала Клеточная линия СНО была описана в 1956 году, многие варианты этой клеточной линии были разработаны для различных целей. В 1957 году CHO-K1 был получен из единственного клона клеток CHO, CHO-K1 был мутагенизирован с помощью этилметансульфоната для получения линии клеток, лишенной активности дигидрофолатредуктазы (DHFR), упомянутой обозначается как CHO-DXB11 (также называемый CHO-DUKX). Однако эти клетки после мутагенизации могут вернуться к активности DHFR, что делает их использование для исследований несколько ограниченным. Впоследствии клетки СНО были мутагенизированы гамма-излучением с получением клеточной линии, в которой оба аллеля локуса DHFR были полностью элиминированы, названная CHO-DG44. Эти DHFR -дефицитным штаммам для роста требуется глицин, гипоксантин и тимидин. Клеточные линии с мутированным DHFR могут быть использованы для генетических манипуляций, поскольку клетки , трансфицированные интересующим геном вместе с функциональной копией гена DHFR, могут быть легко скринингованы в среде без тимидина. По этой причине клетки СНО, лишенные DHFR, являются наиболее широко используемыми клетками СНО для промышленного производства белка. В последнее время стали популярными другие системы селекции, а с векторными системами, которые могут более эффективно воздействовать на активный хроматин в клетках СНО, также можно использовать селекцию антибиотиком (пуромицин) для создания рекомбинантных клеток, экспрессирующих белки на высоком уровне. Для этого было обнаружено, что другие клетки-хозяева, все еще использующие названия, применяемые в период с 1960-х по 1980-е годы (CHO-K1, CHO-S, CHO-Pro минус и т. Д.), Производят превосходные уровни белков. Поскольку клетки СНО имеют очень высокую склонность к генетической нестабильности (как и все иммортализованные клетки), не следует предполагать, что применяемые названия указывают на их пригодность для производственных целей. Большинство, если не все промышленно используемые линии клеток СНО, в настоящее время культивируются в средах, не содержащих компонентов животного происхождения, или в средах определенного химического состава и используются в крупномасштабных биореакторах при суспензионной культуре. Сложная генетика клеток CHO и вопросы, касающиеся клонального происхождения клеточной популяции, широко обсуждались.
Большая часть генетических манипуляций, выполняемых в клетках CHO, осуществляется в клетках, лишенных Фермент DHFR. Эта схема генетической селекции остается одним из стандартных методов создания трансфецированных клеточных линий СНО для продукции рекомбинантных терапевтических белков. Процесс начинается с молекулярного клонирования интересующего гена и гена DHFR в единую систему экспрессии млекопитающего. Затем плазмидную ДНК, несущую два гена, трансфицируют в клетки, и клетки выращивают в селективных условиях в среде без тимидина . Выжившие клетки будут иметь экзогенный ген DHFR вместе с представляющим интерес геном, интегрированным в их геном. Скорость роста и уровень продукции рекомбинантного белка каждой клеточной линией широко варьируют. Для получения нескольких стабильно трансфицированных клеточных линий с желаемыми фенотипическими характеристиками может потребоваться оценка нескольких сотен клеточных линий-кандидатов.
Клеточные линии CHO и CHO-K1 можно получить из ряда центров биологических ресурсов, таких как Европейская коллекция культур клеток, которая является частью коллекций культур Агентства по охране здоровья. Эти организации также хранят данные, такие как кривые роста, временные видеоролики роста, изображения и стандартную информацию о субкультуре.
Клетки СНО являются наиболее распространенной линией клеток млекопитающих, используемой для массового производства. лечебных белков. Они могут производить рекомбинантный белок в количестве 3-10 граммов на литр культуры. Продукты клеток СНО подходят для применения на людях, поскольку они позволяют посттрансляционные модификации рекомбинантных белков, которые могут функционировать у людей.
 | Викискладе есть носители, относящиеся к СНО. клетки. |
