Судебная серология

Судебная серология - это обнаружение, идентификация, классификация и исследование различных жидкостей организма, таких как кровь, сперма, слюна, моча, грудное молоко, рвота, фекалии и пот и их отношение к месту преступления. Судебно-серолог может также участвовать в анализе ДНК и анализе образца крови. Серологические тесты начинаются с предварительных тестов, которые дают аналитику указание на то, что может присутствовать определенная телесная жидкость, но не могут полностью подтвердить ее присутствие. После предполагаемых тестов следуют подтверждающие тесты, которые подтверждают, что на самом деле представляет собой неизвестное вещество.

• 1 Обнаружение крови
• 2 Обнаружение спермы
• 3 Обнаружение слюны
• 4 Текущие исследования: микроРНК
• 5 См. Также
• 6 Ссылки

Кровь состоит из жидкой плазмы и сыворотки с твердыми компонентами, состоящими из эритроцитов (эритроцитов ), лейкоцитов (лейкоцитов ) и тромбоцитов (тромбоцитов ). Для обнаружения крови на месте преступления можно использовать множество тестов. Наиболее разрекламированный в криминалистических шоу тест - это процесс люминол, при котором химическое вещество распыляется на поверхность, где предположительно находится кровь. Химическое вещество вступает в реакцию со следами крови и флуоресцирует в УФ-свете. Однако этот метод может давать ложные срабатывания, потому что металлы и сильные химические вещества, такие как отбеливатель, также будут флуоресцировать. Другой распространенный презумптивный тест - это тест Кастла-Мейера или фенолфталеин. Это каталитический тест, который обнаруживает в крови гемовую группу, которая переносит кислород и углекислый газ. Это двухступенчатая реакция, при которой к предполагаемому образцу крови добавляют одну каплю реагента фенолфталеина, а затем каплю перекиси водорода. Положительный результат вызывает изменение цвета на розовый. Подобно тесту Кастла-Мейера, гемастикс также является каталитическим тестом, упрощенным до специализированной полоски, куда добавляется образец крови, и положительный результат вызывает изменение цвета на темно-зеленый.

Для подтверждающих тестов обычно используют анализ кристаллов Такаямы или иммунохроматографический тест. Анализ кристаллов Такаяма, который формирует ферропротопорфириновое кольцо в результате реакции между пиридином и атомом железа гемовой группы. Реагент Такаяма добавляется на предметное стекло с предполагаемым образцом крови. Предметное стекло сушат при 115 градусах Цельсия после добавления реагента Такаяма. Затем его помещают под микроскоп, и положительным результатом является визуализация темно-красных перистых кристаллов. Что касается иммунохроматографического теста, он работает аналогично тесту на беременность, когда обнаруживаются антигены, присутствующие в крови, и положительный результат представляет собой полосу на участке тестирования и на контрольном участке. После выполнения различных тестов аналитик может подтвердить наличие крови и продолжить разработку профиля ДНК с последующими приложениями, такими как экстракция ДНК, полимеразная цепная реакция ( ПЦР), капиллярный электрофорез (СЕ) и т. Д. С последующей интерпретацией профиля.

Сперма - это бесцветная жидкость, которая эякулирует из полового члена мужчины в результате сексуального возбуждения. Для первоначального обнаружения спермы используется альтернативный источник света (ALS). Под ультрафиолетовым светом сперма флюоресцирует, что позволяет следователям собирать образцы на месте преступления. Обычный презумптивный тест для обнаружения семенной жидкости называется тестом на кислую фосфатазу (AP). Тест AP выявляет фермент кислую фосфатазу, который секретируется предстательной железой. Однако этот тест является лишь предположительным, поскольку кислая фосфатаза обнаруживается в других жидкостях организма. Для проведения теста к предполагаемому красителю добавляют каплю реагента альфа-нафтифосфата натрия, а затем каплю быстрого синего B. Положительный результат этого теста - изменение цвета на темно-фиолетовый.

Подтверждающий. тесты на сперму включают пятно от елки и набор p30 / PSA RSID. Что касается пятна от рождественской елки, образец экстрагируют стерильной водой, чтобы сделать влажную основу на предметном стекле микроскопа. Затем образец фиксируют нагреванием на предметном стекле и окрашивают ядерно-стойким красным в течение 15 минут, затем промывают деионизированной водой. Далее наносится зеленое пятно на 10 секунд, затем смывается этанолом. Предметное стекло помещают под сложный световой микроскоп для наблюдения за сперматозоидами. Если присутствуют сперматозоиды, головки будут окрашиваться в красный цвет, а средняя часть и хвост - в зеленый. Однако не все мужчины выделяют сперму в свою сперму. Если у мужчины аспермия или олигоспермия, у него либо нет сперматозоидов, либо количество сперматозоидов низкое. Самцы после вазэктомии также не выделяют сперму. Когда сперматозоиды отсутствуют, проводится второй подтверждающий тест, тест p30 / PSA.

PSA (p30) известен как простатоспецифический антиген, который продуцируется предстательная железа у мужчин. Тест на p30 / PSA - это иммунохроматографический тест, который определяет присутствие антигена p30 в образцах спермы. Этот тест работает аналогично тесту на беременность, где, если присутствует антиген p30, на участке тестирования появится полоса, а для подтверждения правильности работы теста появится контрольная полоса. Если подтверждающий тест положительный, значит, в образце присутствует сперма. Оттуда аналитик может продолжить разработку профиля ДНК с последующими приложениями.

Предположительным тестом для обнаружения слюны является тест на альфа-амилазу, также известный как тест Phadebas. Этот метод обнаружения основан на активности фермента альфа-амилазы, который расщепляет крахмалы из пищи на более мелкие молекулы олигосахаридов, начиная пищеварение во рту. Используя гель для чашки Петри, добавляют образец слюны и дают ему диффундировать через гель в течение ночи. Визуализация достигается путем добавления к гелю йода, который окрашивает крахмал в гелевый синий цвет. Если присутствует слюна, то альфа-амилаза расщепляет крахмал, образуя четкий цветной круг вокруг того места, где был помещен образец.

Для подтверждающих тестов было проведено не так много исследований, как крови и спермы. Тем не менее, для обнаружения альфа-амилазы был проведен тест RSID, но он не всегда надежен, поскольку может быть много ложных срабатываний.

Тестирование различных жидкостей организма с помощью традиционных серологических методов, таких как перечисленные выше, возможно, но не без некоторых недостатков. Во-первых, не все биологические жидкости имеют надежный подтверждающий тест, а те, которые действительно требуют большего количества подозреваемого пятна, чтобы выполнить подтверждающий тест. Это может быть ограничением, если исследуемая судебно-медицинская выборка изначально небольшая. Кроме того, серологическое исследование часто проводится перед любыми последующими анализами, такими как ДНК, поэтому, если размер образца ограничен, начать с выполнения серологических анализов и успешно получить профиль ДНК может быть невозможно. В настоящее время исследователи ищут способы более успешной идентификации биологических жидкостей и меньшего количества требуемых образцов, и появляется новый способ сделать это с помощью микро РНК.

МикроРНК (miRNA ) представляют собой небольшие некодирующие одноцепочечные РНК, которые используются для регуляции экспрессии генов посредством регуляции трансляции (синтеза белка) или маркировки мессенджера РНК (мРНК) для деградации. Учитывая их регулирующую роль, теория состоит в том, что разные miRNA будут присутствовать в разных количествах в определенных типах жидкости или тканей, потому что каждый из этих типов тканей должен иметь уникальные белки и мРНК в зависимости от их роли в организме. MiRNA также являются идеальной мишенью для судебно-медицинского анализа, потому что они малы по сравнению с другими клеточными компонентами, поэтому они, как правило, лучше сопротивляются деградации, чем другие тканевые маркеры, что важно, учитывая, что рабочие образцы не всегда будут в первозданном состоянии. Наконец, miRNA могут быть совместно извлечены и проанализированы одновременно с ДНК, объединяя два процесса в один для анализа биологических образцов, экономя время и образцы.

миРНК можно экстрагировать с использованием ряда имеющихся в продаже наборов, таких как мини-набор для твердофазной ДНК QIAmp. В идеале, как и в случае с набором QIAmp, используемый метод экстракции позволяет извлекать ДНК и миРНК одновременно, сводя к минимуму количество реакций и количество используемого образца. miRNAs можно количественно определить с помощью количественной ПЦР в реальном времени, аналогично традиционным образцам ДНК. Однако для этого должны быть созданы праймеры и зонды для мишеней miRNA. В отличие от обычного профилирования ДНК, амплификация miRNA требует дополнительного шага перед процессом ПЦР. miRNA требует стадии обратной транскрипции для преобразования фрагментов miRNA в их комплементарные фрагменты ДНК (cDNA ). После этого преобразования кДНК и другие ДНК в образце могут быть амплифицированы с помощью ПЦР, а затем разделены / визуализированы с использованием протокола капиллярного электрофореза. Специфические праймеры кДНК должны быть разработаны для ваших мишеней miRNA. Конечным результатом является электрофореграмма, которая содержит не только профиль STR образца, но также пик, представляющий, какая miRNA присутствует в этом образце.

Текущие потенциальные биомаркеры miRNA: все еще необходимы исследования, чтобы сузить количество потенциальных биомаркеров, поскольку некоторые ткани и жидкости имеют одну и ту же miRNA, экспрессируемую в разных концентрациях. На сегодняшний день миРНК крови и спермы являются наиболее изученными и обнаружили многообещающие кандидаты в биомаркеры.

• RSID
• Карл Ландштейнер
• Пол Уленхут
• микроРНК

1. ^Уголовное расследование, Рональд Ф. Беккер, стр. 8 Издатель: Jones Bartlett Publishers; 3-е издание (22 августа 2008 г.) Язык: английский ISBN 0-7637-5522-2
2. ^Основы судебной медицины Макс М. Хоук, Джей А. Сигел с. 229 Издательство: Academic Press; 2-е издание (3 февраля 2010 г.) Язык: английский ISBN 0-12-374989-1
3. ^ «Криминалистические ресурсы». www.ncids.com. Проверено 25 октября 2018 г.
4. ^ Батлер, Джон (2005). Судебная типизация ДНК. США: Academic Press. Стр. 39 –42. ISBN 9781493300204.
5. ^«Идеи проектов для Science Fair». Друзья науки. Проверено 25 октября 2018 г.
6. ^ Gaensslen, R.E. (Август 1983 г.). «Справочник по судебной серологии, иммунологии и биохимии» (PDF). Министерство юстиции США.
7. ^ «Превышен предел загрузки». CiteSeerX 10.1.1.618.2623. Cite journal требует | journal =()
8. ^Courts, C., Madea, B. (2010). Micro-rna- потенциал для судебной медицины. Forensic Science International. 203; 106-111
9. ^Courts, C., Madea, B. (2010). Micro-rna- потенциал для судебной медицины. Forensic Science International. 203; 106-111
10. ^Meer, D., Uchimoto, M., Williams, G. (2013). Одновременный анализ микро-РНК и ДНК для определения происхождения профилей ДНК из жидкости организма. Journal of Судебная медицина. 58,4; 967-971
11. ^Тонг Д., Джин И, Сюэ Т., Ма Х, Чжан Дж., Оу Х и др. (2015) Исследование применения miR10b и miR135b в идентификации спермы Stains. PLoS ONE 10 (9): e0137067. Doi: 10.1371 / journal.pone.0137067
12. ^Meer, D., Uchimoto, M., Williams, G. (2013). Одновременный анализ микро-РНК и ДНК для определение происхождения биологических жидкостей по профилям ДНК. Journal of Forensic Sciences. 58,4; 967-971
13. ^Meer, D., Uchimoto, M., Williams, G. (2013). Simporaryo анализ микро-РНК и ДНК для определения происхождения профилей ДНК из жидкости организма. Журнал судебной медицины. 58,4; 967-971
14. ^Hanson, E.K., Lubenow, H., Ballantyne, J. (2009). Идентификация криминалистически значимых биологических жидкостей с использованием панели дифференциально экспрессируемых микроРНК. Аналитическая биохимия. 387, 303-314.