Barnase | |
---|---|
Плотно связанный комплекс между барнасом и его ингибитор барстар. Barnase окрашен вторичной структурой, а barstar окрашен в синий цвет. | |
Идентификаторы | |
Symbol | Barnase |
PDB | 1BRS Другие структуры |
UniProt | P00648 |
Прочие данные | |
Номер ЕС | 3.1.27.- |
Barnase (портмоне «Бактериальной» «Рибонуклеазы») представляет собой бактериальный белок, состоящий из 110 аминокислот и обладающий рибонуклеазной активностью. Он синтезируется и секретируется бактерией Bacillus amyloliquefaciens, но является летальным для клетки при экспрессии без ее ингибитора barstar. Ингибитор связывается с активным сайтом рибонуклеазы и блокирует его, предотвращая повреждение барназой РНК клетки после того, как она была синтезирована, но до того, как она будет секретирована. Комплекс барназа / барстар отличается чрезвычайно прочным связыванием белок-белок с скоростью 10 сМ.
Барназа не имеет дисульфидных связей и не требует сворачивания непептидных компонентов. Эта простота в сочетании с обратимым переходом сворачивания означает, что барназа была тщательно изучена для понимания того, как белки сворачиваются. Сворачивание барназы широко изучалось в лаборатории Алана Фершта, который использовал его в качестве тестового примера при разработке метода характеристики сворачивания белка переходных состояний известный как анализ значения phi.
Барназа катализирует гидролиз по сайтам GpN дирибонуклеотидов. Расщепление происходит в две стадии с использованием общего кислотно-основного механизма : на первой стадии переэтерификации образуется циклический промежуточный продукт, который затем гидролизуется с высвобождением расщепленной РНК. Двумя наиболее важными остатками, участвующими в катализе, являются Glu73 и His102, которые необходимы для ферментативной активности. Glu73 является основным основанием, а His102 - общей кислотой. Хотя он не участвует напрямую в кислотно-основном катализе, Lys27 также имеет решающее значение для активности; он участвует в связывании субстрата в переходном состоянии.
.