Нитроцефин

редактировать

Нитроцефин
Идентификаторы

Название ИЮПАК (2S, 5R, 6R) -6 - {[карбокси (фенил) ацетил] амино} -. 3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло [3.2.0]. гептан-2-карбоновая кислота
Номер CAS	41906- 86-9
PubChem CID	6436140
ChemSpider	4940809
UNII	EWP54G0J8F
ChEMBL	ChEMBL480517
ECHA InfoCard	100.164.734
Химические и физические данные
Формула	C21H16N4O8S2
Молярная масса	516,50 г · моль

. Нитроцефин является хромогенным субстратом цефалоспорина обычно используется для обнаружения присутствия ферментов бета-лактамазы, продуцируемых различными микробами. Опосредованная бета-лактамазой устойчивость к бета-лактам антибиотикам, таким как пенициллин, является широко распространенным механизмом устойчивости для ряда бактерий, включая членов из семейства Enterobacteriaceae, основной группы кишечных грамотрицательных бактерий. Существуют и другие методы обнаружения бета-лактамазы, включая ПЦР ; однако нитроцефин обеспечивает быстрое обнаружение бета-лактамазы с использованием небольшого количества материалов и недорогого оборудования.

Содержание

1 Структура
2 Деградация и хромогенные свойства
3 Анализы обнаружения
4 См. Также
5 Ссылки

Структура

Как цефалоспорин, нитроцефин содержит бета-лактамное кольцо, которое чувствительно к бета-лактамазе. опосредованный гидролиз. После гидролиза разложившееся соединение нитроцефина быстро меняет цвет с желтого на красный. Хотя нитроцефин считается цефалоспорином, он не обладает противомикробными свойствами.

Разложение и хромогенные свойства

Интактный бета-лактам антибиотики действуют путем связывания с пенициллин-связывающими белками (PBP), участвующими в синтезе пептидогликана. Бета-лактамазы гидролизуют амидную связь между карбонилом углеродом и азотом в бета -лактам кольцо восприимчивых бета-лактамов и представителей подклассов бета-лактамов (включая некоторые цефалоспорины). После гидролиза амидной связи антибиотик теряет способность связывать бактериальные PBP и становится бесполезным. Визуальное обнаружение этого процесса практически невозможно с большинством цефалоспоринов, потому что сдвиг ультрафиолетового поглощения от интактного по сравнению с гидролизованным продуктом происходит за пределами видимого спектра. Однако гидролиз нитроцефина вызывает сдвиг поглощения ультрафиолета в видимом спектре света от интактного (желтого) нитроцефина (~ 380 нм) до деградированного (красного) нитроцефина (~ 500 нм), что позволяет визуально определять активность бета-лактамазы на макроскопическом уровне.

Анализы обнаружения

Следующие анализы описывают методы, в которых нитроцефин может быть использован для обнаружения ферментов бета-лактамазы с использованием недорогих материалов и оборудования. Рабочие растворы нитроцефина лежат в пределах от 0,5 мг / мл до 1,0 мг / мл.

Анализ поверхности предметного стекла

Добавьте одну каплю 0,5 мг / мл нитроцефина на поверхность чистого предметного стекла.
Выберите колонию с поверхности агара, используя стерильную петлю и смешать с каплей.
Появление красного цвета через 20-30 мин. указывает на бета-лактамазную активность.

Тест прямого контакта

Поместите одну каплю 0,5 мг / мл нитроцефина непосредственно на поверхность изолированной колонии.
Появление красного цвета в пределах 20 -30 минут. указывает на активность бета-лактамазы.

Анализ суспензии в бульоне

Добавьте 3-5 капель 0,5 мг / мл нитроцефина в 1 мл суспензии в бульоне.
Появление красного цвета внутри 20-30 мин. указывает на бета-лактамазную активность.

Анализ лизированных клеток

Лизируйте 1 мл клеточной суспензии обработкой ультразвуком.
Добавьте 3-5 капель 0,5 мг / мл нитроцефина в суспензию лизированных клеток.
Появление красного цвета в течение 20-30 мин. указывает на активность бета-лактамазы.

Анализ фильтровальной бумаги

Поместите небольшой кусок фильтровальной бумаги (~ 3 x 3 см) в чистую чашку Петри или другую чистую изолированную поверхность и пропитайте (3- 5 мл) с 0,5 мг / мл нитроцефина
Выберите изолированную колонию и нанесите на поверхность пропитанной фильтровальной бумаги.
Появление красного цвета в пределах 20-30 мин. указывает на активность бета-лактамазы

См. также

Ссылки