Дрожжевой дисплей

Отображение дрожжей (или отображение поверхности дрожжей ) - это метод инженерии белка, который использует выражение рекомбинантные белки, встроенные в клеточную стенку дрожжей для выделения и конструирования антител.

• 1 Разработка
• 2 Как это работает
• 3 Преимущества и Недостатки
• 4 Ссылки
• 5 Дополнительная литература

Методика дрожжевого дисплея была впервые опубликована в лаборатории профессора К. Дэйна Виттрупа. Технология была продана Abbott Laboratories в 2001 году.

Интересующий белок отображается в виде слияния с белком Aga2p на поверхности дрожжей. Белок Aga2p естественным образом используется дрожжами для обеспечения межклеточных контактов во время спаривания дрожжевых клеток. Таким образом, отображение белка через Aga2p отталкивает белок от поверхности клетки, сводя к минимуму возможные взаимодействия с другими молекулами на клеточной стенке дрожжей. Использование магнитной сепарации и проточной цитометрии в сочетании с библиотекой дрожжевых дисплеев является высокоэффективным методом выделения высокоаффинных белков лигандов практически против любых от рецептора до направленной эволюции.

Преимущества дрожжевого дисплея перед другими методами эволюции in vitro включают эукариотическую экспрессию и процессинг, механизмы контроля качества секреторного пути эукариот, минимальные эффекты авидности и количественный скрининг библиотеки посредством сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS). Дрожжи - это эукариотические организмы, которые допускают сложные посттрансляционные модификации белков, которые не могут обеспечить никакие другие дисплейные библиотеки.

К недостаткам относятся меньшие размеры мутантной библиотеки по сравнению с альтернативными методами и дифференциальное гликозилирование в дрожжах по сравнению с клетками млекопитающих. Эти недостатки не ограничивают успех дрожжевого дисплея для ряда приложений, включая разработку наивысшего сродства связывания моновалентного лиганда, о котором сообщалось на сегодняшний день для сконструированного белка (Boder, E.T.2000). В настоящее время библиотека дрожжевых дисплеев, созданная Boder, больше не доступна, так как линия клеток INVSc1 от Invitrogen больше не доступна из-за проблем с IP.

Альтернативными методами эволюции белка in vitro являются: фаговый дисплей, рибосомный дисплей, бактериальный дисплей и дисплей мРНК.

• Boder, ET, Wittrup, KD; Biotechnol. Prog., 1998, 14, 55–62.
• Boder E.T., Midelfort K.S., Wittrup K.D.; Proc Natl Acad Sci, 2000, 97 (20): 10701-10705.
• Graff, C.P., Chester, K., Begent, R., Wittrup, K.D.; Prot. Англ. Des. Sel., 2004, 17, 293–304.
• Feldhaus M, Siegel R.; Методы молекулярной биологии 263: 311–332 (2004).
• Weaver-Feldhaus, Jane M; Лу, Цзяньлун; Коулман, Джеймс Р.; Сигел, Роберт В; Маркс, Джеймс Д; Фельдхаус, Майкл Дж (2004). «Связывание дрожжей для комбинаторной генерации библиотеки Fab и отображения на поверхности». Письма FEBS. 564 (1–2): 24–34. DOI : 10.1016 / S0014-5793 (04) 00309-6. ISSN 0014-5793. PMID 15094038. S2CID 29737912.