Войти
| РНК-полимераза T7 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
 T7 РНК-полимераза (синий), продуцирующая мРНК (голубой) из двухцепочечной ДНК-матрицы (оранжевый). | |||||||
| Идентификаторы | |||||||
| Организм | фаг T7 | ||||||
| Символ | 1 | ||||||
| PDB | 1MSW | ||||||
| UniProt | P00573 | ||||||
| |||||||
РНК-полимераза T7 - это РНК-полимераза из T7 бактериофаг, который катализирует образование РНК из ДНК в направлении 5 '→ 3'.
Полимераза Т7 является чрезвычайно промоторной -специфичной и транскрибирует ДНК только ниже промотора Т7. Полимераза Т7 также требует двухцепочечной ДНК-матрицы и иона Mg в качестве кофактора для синтеза РНК. У него очень низкий уровень ошибок. Полимераза Т7 имеет молекулярную массу 99 кДа.
Промотор распознается для связывания и инициации транскрипции. Консенсус в отношении T7 и связанных фагов:
5 '* 3' T7 TAATACGACTCACTATAGGGAGA T3 AATTAACCCTCACTAAAGGGAGA K11 AATTAGGGCACACTATAGGGAGA SP6 ATTTACGACACACTATAGAAGAA bind ------------ --------- --init
Транскрипция начинается с гуанина, отмеченного звездочкой.
Полимераза Т7 кристаллизовалась в нескольких формах, и структуры, помещенные в PDB. Они объясняют, как полимераза Т7 связывается с ДНК и транскрибирует ее. N-концевой домен перемещается по мере образования комплекса удлинения. SsRNAP содержит гибрид ДНК-РНК размером 8 пар оснований. Петля специфичности бета-шпильки (остатки 739-770 в Т7) распознает промотор; замена его на один, обнаруженный в РНКП Т3, заставляет полимеразу распознавать промоторы Т3.
Подобно другим полимеразам вирусных нуклеиновых кислот, включая ДНК-полимеразу Т7 из той же фага, консервативный C-конец ssRNAP T7 имеет складку, организацию которой можно сравнить с формой правой руки с тремя субдоменами, называемыми пальцами, ладонью и большим пальцем. N-конец менее консервативен. Он образует промотор-связывающий домен (PBD) со спиральными связками в ssRNAP фага, свойство, не обнаруженное в ssRNAP митохондрий.
| ДНК-направленная РНК-полимераза фагового типа | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Идентификаторы | |||||||||
| Символ | RNA_pol | ||||||||
| Pfam | PF00940 | ||||||||
| InterPro | IPR002092 | ||||||||
| SCOPe | 1msw / SUPFAM | ||||||||
| |||||||||
Полимераза T7 является типичным представителем семейства односубъединичной ДНК-зависимой RNAP (ssRNAP). Другие члены включают РНК-полимеразы фага Т3 и SP6, митохондриальную РНК-полимеразу (POLRMT ) и хлоропластную ssRNAP. Семейство ssRNAP структурно и эволюционно отличается от мульти-субъединичного семейства РНК-полимераз (включая бактериальные и эукариотические подсемейства). В отличие от бактериальных РНК-полимераз, полимераза Т7 не ингибируется антибиотиком рифампицином. Это семейство связано с односубъединичной обратной транскриптазой и ДНК-полимеразой.
В биотехнологических приложениях РНК-полимераза Т7 обычно используется для транскрипции ДНК, которая была клонирована в векторы, которые имеют два (разных) фаговых промотора (например, Т7 и Т3 или Т7 и SP6) в противоположной ориентации. РНК может быть избирательно синтезирована из любой цепи вставки ДНК с различными полимеразами. Фермент стимулируется спермидином, а активность in vitro увеличивается за счет присутствия белков-носителей (таких как BSA )
с помощью этой системы можно получить гомогенно меченую одноцепочечную РНК. Транскрипты могут быть нерадиоактивно мечен с высокой специфической активностью с определенными мечеными нуклеотидами.
