Войти
Тест нейтрализации уменьшения образования бляшек используется для количественной оценки титра нейтрализующего антитела для вируса.
Образец сыворотки или раствор исследуемого антитела разбавляют и смешивают с вирусной суспензией. Его инкубируют, чтобы позволить антителу реагировать с вирусом. Его выливают на конфлюэнтный монослой клеток-хозяев. Поверхность клеточного слоя покрыта слоем агара или карбоксиметилцеллюлозы для предотвращения беспорядочного распространения вируса. Концентрацию бляшкообразующих единиц можно оценить по количеству бляшек (областей инфицированных клеток), образовавшихся через несколько дней. В зависимости от вируса, бляшкообразующие единицы измеряются под микроскопом, флуоресцентными антителами или специфическими красителями, которые реагируют с инфицированными клетками.
Концентрация сыворотки для уменьшения количества бляшек на 50% по сравнению с сывороткой без вирус дает оценку количества антител и их эффективности. Это измерение обозначается как значение PRNT 50.
В настоящее время он считается «золотым стандартом» для обнаружения и измерения антител, которые могут нейтрализовать вирусы, вызывающие многие заболевания. Он имеет более высокую чувствительность, чем другие тесты, такие как гемагглютинация и многие коммерческие иммуноферментные тесты, без ущерба для специфичности. Более того, он более специфичен, чем другие серологические методы диагностики некоторых арбовирусов.
Однако этот тест является относительно громоздким и трудоемким (несколько дней) по сравнению с наборами EIA, которые дают быстрые результаты (обычно от нескольких минут до нескольких часов).
Проблема этого анализа, которая была недавно выявлена, заключается в том, что нейтрализующая способность антител зависит от состояния созревания вириона и типа клеток, используемых в анализе. Следовательно, если для анализа используется неправильная клеточная линия, может показаться, что антитела обладают нейтрализующей способностью, хотя на самом деле ее нет, или наоборот, они могут показаться неэффективными, если они действительно обладают нейтрализующей способностью.
