Войти
Галактозидазы - это ферменты (гликозидгидролазы ), которые катализируют гидролиз галактозиды в моносахариды.
Галактозиды можно разделить на альфа или бета. Если галактозид классифицируется как альфа-галактозид, фермент называется альфа-галактозидаза и отвечает за катализатор гидролиза субстратов, содержащих α-галактозидные остатки, таких как гликосфинголипиды или гликопротеины. С другой стороны, если это бета-галактозид, он называется бета-галактозидазой и отвечает за расщепление дисахарида лактозы на его моносахаридные компоненты, глюкозу. и галактоза Обе разновидности галактозидазы относятся к категории номер ЕС 3.2.1.
Две рекомбинантные формы альфа-галактозидазы называются агалсидазой альфа (INN ) и агалсидазой бета (ИНН ). Отсутствие активности альфа-галактозидазы в лейкоцитах связано с болезнью Фабри.
. Галактозидазы имеют множество применений, включая производство пребиотиков, биосинтез трансгалактозилированных продуктов и удаление лактозы..
B-галактозидаза составляет основу lacz-оперона у бактерий, который можно использовать для контроля экспрессии генов.
B-галактозидаза может быть использована для отслеживания эффективности бактериальной трансформации с помощью рекомбинантной плазмиды в процессе, называемом скринингом синего / белого цвета. B-галактозидаза состоит из 4 идентичных полипептидных цепей, то есть имеет 4 идентичные субъединицы. Когда B-галактозидаза разделена на 2 фрагмента, она обладает уникальным свойством восстановления ферментативной активности при повторном соединении неактивных фрагментов. В процессе, называемом альфа-комплементацией, один из фрагментов (омега) кодируется частью гена lac-оперона, который находится в хромосоме бактерий, а другой фрагмент (альфа) кодируется другой частью. гена, обнаруженного в плазмиде. только когда экспрессируются обе части гена, образуются как омега-, так и альфа-фрагменты. Когда присутствуют оба фрагмента, они собираются вместе, чтобы восстановить активность B-галактозидазы. Однако, поместив целевой ген в локус, ответственный за кодирование альфа-фрагмента, можно отследить присутствие желаемого гена в плазмиде. Когда целевой ген присутствует, ген альфа-фрагмента будет неактивным, и альфа-фрагмент не будет производиться. В этом случае B-галактозидаза не будет активна. Когда целевой ген не обнаружен в векторе, ген альфа-фрагмента будет активен, продуцируя альфа-фрагмент и позволяя B-галактозидазе получить свою активность. Для отслеживания активности B-галактозидазы используется бесцветный аналог лактозы X-gal. Гидролиз X-gal с помощью B-галактозидазы дает галактозу, соединение синего цвета. Следовательно, когда бактерии трансформируются рекомбинантной плазмидой, B-галактозидаза неактивна и колонии выглядят белыми, но когда бактерии трансформируются исходной плазмидой без целевого гена, B-галактозидаза активна, и колонии выглядят синими.
