Электронная томография (ET) - это метод томографии для получения детальных 3D структур субклеточных макро- молекулярные объекты. Электронная томография является расширением традиционной просвечивающей электронной микроскопии и использует просвечивающий электронный микроскоп для сбора данных. При этом пучок электронов проходит через образец с возрастающими градусами вращения вокруг центра целевого образца. Эта информация собирается и используется для построения трехмерного изображения цели. Для биологических приложений типичное разрешение систем ET находится в диапазоне 5–20 нм, что подходит для исследования надмолекулярных мультибелковых структур, но не вторичной и третичной структуры отдельный белок или полипептид.
В области биологии светлопольная просвечивающая электронная микроскопия (BF-TEM) и TEM высокого разрешения (HRTEM ) являются основными методами визуализации для получения серий наклона томографии. Однако есть две проблемы, связанные с BF-TEM и HRTEM. Во-первых, получение интерпретируемой трехмерной томограммы требует, чтобы интенсивность проецируемого изображения монотонно изменялась в зависимости от толщины материала. Это условие трудно гарантировать в BF / HRTEM, где в интенсивности изображения преобладает фазовый контраст с возможностью множественных инверсий контраста с толщиной, что затрудняет различение пустот от включений высокой плотности. Во-вторых, передаточная функция контрастности BF-TEM - это, по сути, фильтр верхних частот - информация на низких пространственных частотах значительно подавляется, что приводит к преувеличению резкости. Однако метод кольцевой темнопольной сканирующей просвечивающей электронной микроскопии (ADF-STEM), который обычно используется на образцах материалов, более эффективно подавляет фазовый и дифракционный контраст, обеспечивая интенсивность изображения, которая зависит от проецируемой массы. -толщина образцов до микрометров для материалов с низким атомным номером . ADF-STEM также действует как фильтр нижних частот, устраняя артефакты выделения контуров, характерные для BF / HRTEM. Таким образом, при условии, что особенности могут быть разрешены, томография ADF-STEM может дать надежную реконструкцию подлежащего образца, что чрезвычайно важно для ее применения в материаловедении. Для получения трехмерных изображений разрешение традиционно описывается критерием Кроутера. В 2010 году 3D-разрешение 0,5 ± 0,1 × 0,5 ± 0,1 × 0,7 ± 0,2 нм было достигнуто с помощью одноосной томографии ADF-STEM. Недавно было продемонстрировано атомное разрешение в реконструкциях трехмерной электронной томографии. Томография ADF-STEM недавно использовалась для прямой визуализации атомной структуры винтовых дислокаций в наночастицах.
Наиболее популярными методами наклона являются одноосный и двухосный методы наклона. Геометрия большинства держателей образцов и электронных микроскопов обычно исключает наклон образца на полный диапазон 180 °, что может привести к артефактам при трехмерной реконструкции мишени. При использовании наклона по двум осям артефакты реконструкции уменьшаются в по сравнению с наклоном по одной оси. Однако необходимо сделать вдвое больше изображений. Другой метод получения серии наклона - это так называемый метод конической томографии, при котором образец наклоняется, а затем поворачивается на полный оборот.