TUNEL assay

Терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой dUTP-метка по нику (TUNEL ) - это метод обнаружения фрагментации ДНК путем мечения 3'-гидроксильных концов в двухцепочечных разрывах ДНК. сгенерировано во время апоптоза.

• 1 Метод
• 2 История
• 3 Ссылки
• 4 Внешние ссылки

TUNEL - это метод обнаружения апоптотическая фрагментация ДНК, широко используется для идентификации и количественной оценки апоптотических клеток или для обнаружения чрезмерного разрыва ДНК в отдельных клетках. Тест основан на использовании концевой дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT), фермента, который катализирует прикрепление дезоксинуклеотидов, помеченных флуорохром или другой маркер, к 3'-гидроксильным концам двухцепочечных разрывов ДНК. Он также может маркировать клетки, ДНК которых повреждена не в ходе апоптоза.

Анализ TUNEL на основе флуорохромов, применимый для проточной цитометрии, объединяющий обнаружение разрывов цепей ДНК по отношению к клеточному циклу - фазовое положение, первоначально была разработана Gorczyca et al. Одновременно с этим, анализ мечения авидин-пероксидазой, применимый для светопоглощающего микроскопа, был описан Gavrieli et al. С 1992 года TUNEL стал одним из основных методов обнаружения апоптотической запрограммированной гибели клеток. Однако в течение многих лет велись споры о его точности из-за проблем в исходном анализе, из-за которых некротические клетки были неправильно обозначены как апоптотические. Впоследствии этот метод был значительно улучшен, и при правильном выполнении он должен идентифицировать клетки только в последней фазе апоптоза. Новые методы включают dUTP, модифицированные флуорофорами или гаптенами, включая биотин или бром, которые могут быть обнаружены непосредственно в случае флуоресцентно-модифицированного нуклеотида (т. Е., флуоресцеин-dUTP), или косвенно со стрептавидином или антителами, если используются биотин-dUTP или BrdUTP, соответственно. Наиболее чувствительным из них является метод, включающий включение BrdUTP с помощью TdT с последующим иммуноцитохимическим обнаружением BrdU.

1. ^Gorczyca W, Traganos F, Jesionowska H, ​​Darzynkiewicz Z (1993). «Наличие разрывов цепи ДНК и повышенная чувствительность ДНК in situ к денатурации в аномальных человеческих сперматозоидах. Аналогия апоптозу соматических клеток». Exp Cell Res. 207 (1): 202–205. doi : 10.1006 / excr.1993.1182. PMID 8391465.
2. ^Лосано Г.М., Бехарано И., Эспино Дж., Гонсалес Д., Ортис А., Гарсиа Дж. Ф., Родригес А. Б., Париенте Дж. А. (2009). «Капситация с градиентом плотности является наиболее подходящим методом для улучшения оплодотворения и уменьшения фрагментации ДНК сперматозоидов бесплодных мужчин». Анатолийский журнал акушерства и гинекологии. 3 (1): 1–7.
3. ^Лосано Г.М., Бехарано И., Эспино Дж., Гонсалес Д., Ортис А., Гарсиа Дж. Ф., Родригес А. Б., Париенте Дж. А. (2009). «Взаимосвязь между активностью каспазы и маркерами апоптоза в сперме человека в ответ на перекись водорода и прогестерон». Журнал воспроизводства и развития. 55 (6): 615–621. DOI : 10.1262 / jrd.20250. PMID 19734695.
4. ^Горчица В., Бруно С., Дарзинкевич Р.Дж., Гонг Дж., Дарзинкевич З. (1992). «Разрывы цепи ДНК, происходящие во время апоптоза: их раннее обнаружение in situ с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы и анализов ник-трансляции и предотвращение с помощью ингибиторов сериновой протеазы». Международный журнал онкологии. 1 (6): 639–648. doi : 10.3892 / ijo.1.6.639. PMID 21584593.
5. ^Гавриэли Ю., Шерман И., Бен-Сассон С.А. (1992). «Идентификация запрограммированной гибели клеток in situ посредством специфической маркировки фрагментации ядерной ДНК». J. Cell Biol. 119 (3): 493–501. doi : 10.1083 / jcb.119.3.493. PMC 2289665. PMID 1400587. CS1 maint: несколько имен: список авторов (ссылка )
6. ^Darzynkiewicz Z, Galkowski D, Zhao H (2008). " Анализ апоптоза цитометрией с использованием теста TUNEL ». Methods. 44 (3): 250–254. doi : 10.1016 / j.ymeth.2007.11.008. PMC 2295206. PMID 18314056.
7. ^Grasl-Kraupp B, Ruttkay-Nedecky B, Koudelka H, ​​Bukowska K, Bursch W, Schulte-Hermann R (1995). «Обнаружение фрагментированной ДНК in situ (анализ TUNEL) не позволяет различать апоптоз, некроз и аутолитическую гибель клеток: предостережение». Гепатология. 21 (5): 1465–8. doi : 10.1002 / hep.1840210534. PMID 7737654.
8. ^Negoescu A, Lorimier P, Labat-Moleur F, Drouet C, Robert C, Guillermet C, Brambilla C, Brambilla E (1996). «Мечение апоптотических клеток in situ методом TUNEL: улучшение и оценка клеточных препаратов». J Histochem Cytochem. 44 (9): 959–68. doi : 10.1177 / 44.9.8773561. PMID 877 3561.
9. ^Негоеску А., Гильермет С., Лоримир П., Брамбилла Е., Лабат-Молер Ф (1998). «Важность фрагментации ДНК в апоптозе с учетом специфичности TUNEL». Biomed Pharmacother. 52 (6): 252–8. DOI : 10.1016 / S0753-3322 (98) 80010-3. PMID 9755824.
10. ^Li X, Darzynkiewicz Z (1995). «Маркировка разрывов цепи ДНК с помощью BrdUTP. Выявление апоптоза и пролиферации клеток». Распространение клеток. 28 (11): 571–579. doi : 10.1111 / j.1365-2184.1995.tb00045.x. PMID 8555370.

• TUNEL в Национальной медицинской библиотеке США Медицинские предметные заголовки (MeSH)