Войти
Радиальная иммунодиффузия (RID) или Метод Манчини, иммунодиффузия Манчини или однократный радиальный иммунодиффузионный анализ, является иммунодиффузией. n метод, используемый в иммунологии для определения количества или концентрации антигена в образце.
Раствор, содержащий антитело, добавляют к нагретой среде, такой как агар или агароза, растворенная в забуференном физиологический раствор. Затем расплавленную среду выливают на предметное стекло микроскопа или в открытый контейнер, например, чашку Петри, и дают ему остыть и образовывать гель. Затем раствор, содержащий антиген, помещают в лунку, которую пробивают в геле. Затем предметное стекло или контейнер накрывают или закрывают для предотвращения испарения.
Антиген диффундирует радиально в среду, образуя круг из преципитина, который отмечает границу между антителом и антигеном. Диаметр круга увеличивается со временем по мере того, как антиген диффундирует в среду, вступает в реакцию с антителом и образует нерастворимые комплексы преципитина. Антиген количественно оценивается путем измерения диаметра кружков преципитина и сравнения его с диаметрами кружков преципитина, образованных известными количествами или концентрациями антигена.
Комплексы антиген-антитело малы и растворимы в избытке антигена. Следовательно, осаждение около центра круга обычно менее плотное, чем около внешнего края круга, где антиген менее сконцентрирован.
Расширение круга достигает конечной точки и прекращается, когда свободный антиген истощается и когда антиген и антитело достигают эквивалентности. Однако четкость и плотность внешнего края круга могут продолжать увеличиваться после того, как круг перестанет расширяться.
Для большинства антигенов площадь и квадрат диаметра круга на конечная точка круга прямо пропорциональна количеству антигена и обратно пропорциональна концентрации антитела. Следовательно, график, на котором сравниваются количества или концентрации антигена в исходных образцах с площадями или квадратами диаметров кружков преципитина на линейных шкалах, обычно будет прямой линией, когда все кружки достигнут своих конечных точек (метод эквивалентности)..
Круги, которые создают небольшие количества антигена, достигают своих конечных точек раньше, чем круги, создаваемые большими количествами. Следовательно, если площади или диаметры кругов измеряются, в то время как некоторые, но не все круги перестали расширяться, такой график будет прямым в той части, которая содержит меньшие количества или концентрации антигена, и будет изогнутой в той части, которая содержит большие количества или концентрации.
Хотя круги все еще расширяются, график, на котором сравниваются количества или концентрации антигена в логарифмической шкале с диаметрами или площадями кругов в линейном масштабе, может быть прямой линией ( кинетический метод). Однако круги в осадке меньше и менее отчетливы во время расширения, чем после того, как расширение закончилось. Кроме того, температура влияет на скорость расширения, но не влияет на размер круга в его конечной точке. Кроме того, диапазон диаметров кружков для одних и тех же количеств или концентраций антигена меньше, в то время как некоторые кружки увеличиваются, чем после того, как все кружки достигли своих конечных точек.
Количество и концентрация нерастворимого антигена-антитела комплексы на внешнем крае круга со временем увеличиваются. Таким образом, ясность и плотность внешнего края круга также увеличиваются со временем. В результате измерения размеров кругов и графики, полученные на основе этих измерений, часто бывают более точными после того, как круги перестали расширяться, чем когда круги все еще увеличиваются. По этим причинам часто более желательно проводить измерения после того, как все круги достигли своих конечных точек, чем проводить измерения, пока некоторые или все круги все еще увеличиваются.
Измерения больших кругов более точны, чем те из маленьких кругов. Поэтому часто бывает желательно отрегулировать концентрацию антитела и количество антигена, чтобы гарантировать, что кольца преципитина будут большими.
