Войти
Лэддеринг ДНК (слева), визуализированный в агарозном геле с помощью окрашивания бромидом этидия. Включены 1 kb маркер (в центре) и контрольный ДНК (справа). Лэддеринг ДНК - это особенность, которую можно наблюдать, когда ДНК фрагменты, полученные в результате апоптотической фрагментации ДНК, визуализируются после разделения с помощью гель-электрофореза. Впервые он был описан в 1980 году Эндрю Уилли из Медицинской школы Эдинбургского университета. Фрагменты ДНК также могут быть обнаружены в клетках, подвергшихся некрозу, но когда эти фрагменты ДНК после разделения подвергаются гель-электрофорезу, не наблюдается четкой «лестничной» картины.
Лэддеринг ДНК является отличительной чертой ДНК, деградированной активируемой каспазой ДНКазой (CAD), что является ключевым событием во время апоптоза. CAD расщепляет геномную ДНК в межнуклеосомных линкерных областях, в результате чего фрагменты ДНК кратны 180–185 парам оснований по длине. Разделение фрагментов с помощью электрофореза в агарозном геле и последующей визуализации, например, окрашиванием бромидом этидия, дает характерный «лестничный» рисунок. Простой метод селективной экстракции фрагментированной ДНК из апоптозных клеток без присутствия участков ДНК с высокой молекулярной массой, генерирующий лестничную диаграмму, использует предварительную обработку клеток этанолом.
Хотя большинство из морфологических признаков апоптозных клеток недолговечны, лестница ДНК может использоваться в качестве метода считывания окончательного состояния и, следовательно, стала надежным методом отличия апоптоза от некроз. Лэддеринг ДНК также можно использовать, чтобы увидеть, подверглись ли клетки апоптозу в присутствии вируса. Это полезно, потому что может помочь определить влияние вируса на клетку.
Лэддеринг ДНК можно использовать только для обнаружения апоптоза на более поздних стадиях апоптоза. Это связано с фрагментацией ДНК, происходящей на более поздней стадии процесса апоптоза. Лэддеринг ДНК используется для тестирования апоптоза многих клеток и не является точным при тестировании только нескольких клеток, которые совершили апоптоз. Чтобы повысить точность тестирования на апоптоз, используются другие анализы наряду с лестничным анализом ДНК, такие как TEM и TUNEL. Благодаря недавним улучшениям в области ДНК-лестницы, она стала более надежной и разумной техникой для обнаружения апоптоза. Также важно отметить, что цепочка ДНК происходит по-разному в зависимости от типа клетки, поэтому могут быть небольшие изменения в процессе лестницы ДНК в зависимости от исследуемой ячейки.
Yeung, MC (2002). «Протокол ускоренного апоптотического анализа ДНК». Биотехнологии. 33 (4): 734–736. doi : 10.2144 / 02334bm03. PMID 12398177.
