Войти
Полимеразная цепная реакция касания или Полимеразная цепная реакция типа приземления - это метод полимеразная цепная реакция, с помощью которой праймеры избегают амплификации неспецифических последовательностей. Температура отжига во время полимеразной цепной реакции определяет специфичность отжига праймера. точка плавления грунтовки устанавливает верхний предел температуры отжига. При температурах чуть выше этой точки будет происходить только очень специфическое спаривание оснований между праймером и матрицей. При более низких температурах праймеры связываются менее специфично. Неспецифическое связывание праймера затрудняет понимание результатов полимеразной цепной реакции, поскольку неспецифические последовательности, с которыми отжигаются праймеры на ранних этапах амплификации, «вытеснят» любые специфические последовательности из-за экспоненциальной природы амплификации полимеразы.
Самые ранние этапы цикла полимеразной цепной реакции касания имеют высокие температуры отжига. Температура отжига постепенно снижается для каждого последующего набора циклов. Праймер будет отжигаться при наивысшей температуре, что является наименее допустимым для неспецифического связывания, которое он способен переносить. Таким образом, первая амплифицированная последовательность находится между областями наибольшей специфичности праймера; скорее всего, это интересующая последовательность. Эти фрагменты будут далее амплифицироваться во время последующих раундов при более низких температурах и будут превосходить неспецифические последовательности, с которыми праймеры могут связываться при этих более низких температурах. Если праймер первоначально (во время более высоких температур) связывается с интересующей последовательностью, последующие раунды полимеразной цепной реакции могут быть выполнены с продуктом для дальнейшей амплификации этих фрагментов. Touchdown увеличивает специфичность реакции при более высоких температурах и увеличивает эффективность ближе к концу за счет снижения температуры отжига.
