Войти
Нуклеаза бобов маш ( Нуклеаза MB) - это нуклеаза, полученная из ростков бобов маш ( Vigna radiata), которая поэтапно удаляет нуклеотиды из одноцепочечных молекул ДНК (оцДНК) и используется в биотехнологических приложениях для удаления такой оцДНК из смесь, также содержащая двухцепочечную ДНК (дцДНК). Этот фермент полезен для картирования транскриптов, удаления одноцепочечных областей в гибридах ДНК или одноцепочечных выступов, продуцируемых рестрикционными ферментами, и т. Д. Он имеет активность, аналогичную нуклеазе S1 (обе имеют EC 3.1.30.1), но имеет более высокую специфичность для одноцепочечных молекул.
Фермент расщепляет одноцепочечную ДНК или РНК до нуклеозидных 5'-монофосфатов, но не расщепляет двухцепочечную ДНК, двухцепочечную РНК или гибриды ДНК / РНК. Нуклеаза фасоли мунг катализирует специфическое разложение одноцепочечной ДНК или РНК и продуцирует моно- и олигонуклеотиды, несущие 5'-P-конец. Нуклеаза бобов мунг имеет строгую одноцепочечную специфичность к ДНК или РНК.
Расчетная молекулярная масса нуклеазы бобов мунг составляет 39 кДа по данным SDS-PAGE. Гликопротеин, 29% этой массы составляют сахара. По состоянию на апрель 2019 года конкретный ген, кодирующий этот белок, неизвестен, и все производство основано на процессе очистки ростков фасоли 1980 года. Некоторым известно о его структуре с одним открытым остатком цистеина и 3 парами дисульфидных связей. Некоторым известно о его аминокислотном составе.
Для нуклеазы бобов мунг требуется Zn 2+. Добавление ЭДТА или ДСН вызывает необратимую инактивацию. Нуклеаза бобов мунг не активна ни при pH ниже 4,6, ни при низкой концентрации соли.
Нуклеазы МБ является специфической ДНК и РНК экзо-эндонуклеазы, которые будут ухудшать одноцепочечные расширения от концов молекул ДНК и РНК, в результате чего тупые концы, ligatable. Его более высокая одноцепочечная специфичность делает его предпочтительным ферментом для большинства применений, требующих одноцепочечной нуклеазы.
В отличие от нуклеазы S1, нуклеаза бобов мунг не расщепляет интактную цепь дуплексной ДНК с разрывом.
Его способность распознавать двухцепочечные нуклеиновые кислоты зависит от последовательности оснований.
Он имеет тенденцию к расщеплению по ApN и по T (U) pN. Он полностью разлагает ApA, но не разрушает G и C. В отличие от нуклеазы S1, он не расщепляет цепь, противоположную разорванной.
Нуклеаза бобов мунг катализирует специфическую деградацию одноцепочечной ДНК или РНК и продуцирует моно- и олигонуклеотиды, несущие 5'-P-конец.
Более чем 1000-кратное количество фермента может разлагать олигомер на все мононуклеотиды.
Избыток фермента необходим для разложения двухцепочечной ДНК или гибридов РНК и ДНК-РНК, и в этом случае участки, богатые АТ, избирательно разлагаются.
Этот фермент хорошо работает на сайтах A ↓ pN, T ↓ pN, и особенно сайты A ↓ pN деградируют на 100%.
Однако разрушить сайт C ↓ pC, C ↓ pG сложно.
Экзонуклеаза бобов мунг представляет собой нуклеазу, полученную из бобов мунг, которая поэтапно удаляет нуклеотиды из одноцепочечных молекул ДНК и используется для удаления такой оцДНК из смеси, также содержащей двухцепочечную ДНК (дцДНК).
Определение единицы:
Одна единица нуклеазы бобов маша превращает 1 мкг денатурированной нагреванием ДНК тимуса теленка в кислотно-растворимую форму за 1 минуту при 37 ° C в стандартных условиях анализа.
Биологический портал 