Войти
След ДНКазыI связывания белка с радиоактивно меченным фрагментом ДНК. Дорожки «GA» и «TC» представляют собой дорожки химического секвенирования Максама-Гилберта, см. Секвенирование ДНК. Полоса, помеченная как «контроль», предназначена для целей контроля качества и содержит фрагмент ДНК, но не обработана ДНКазой I.A Анализ отпечатка ДНКазы - это метод ДНК-отпечатка из молекулярной биологии / биохимия, которая обнаруживает взаимодействие ДНК - белок, используя тот факт, что белок, связанный с ДНК, часто защищает эту ДНК от ферментативного расщепления. Это позволяет найти сайт связывания белка на конкретной молекуле ДНК. В этом методе используется фермент дезоксирибонуклеаза (для краткости ДНКаза) для разрезания ДНК с радиоактивной меткой на концах с последующим гель-электрофорезом для определения полученной картины расщепления.
Например, интересующий фрагмент ДНК может быть ПЦР амплифицирован с использованием праймера, меченного P 5 ', в результате чего будет много молекул ДНК с радиоактивной меткой на одном конце одной цепи каждая двухцепочечная молекула. Расщепление ДНКазой дает фрагменты. Фрагменты, которые меньше по сравнению с концом, меченным Р, будут появляться на геле дальше, чем более длинные фрагменты. Затем гель используется для экспонирования специальной фотопленки.
Картина расщепления ДНК в отсутствие ДНК-связывающего белка, обычно называемая свободной ДНК, сравнивается с картиной расщепления ДНК в присутствии ДНК-связывающего белка. Если белок связывает ДНК, сайт связывания защищен от ферментативного расщепления. Эта защита приведет к появлению на геле чистой области, называемой «отпечатком».
Варьируя концентрацию ДНК-связывающего белка, можно оценить сродство связывания белка в соответствии с минимальной концентрацией белка, при которой наблюдается след.
Этот метод был разработан Дэвидом Галасом и Альбертом Шмитцем в Женеве в 1977 году.
