Войти
Типирование тканей - это процедура, при которой ткани предполагаемого донора и реципиента проверяются на совместимость до трансплантация. Несоответствие тканей донора и реципиента может привести к отторжению тканей. Существует несколько методов тканевого типирования.
Картирование локусов HLA на хромосоме 6 Во время тканевого типирования выявляются человеческие лейкоцитарные антигены (HLA) человека. Молекулы HLA представлены на поверхности клеток и способствуют взаимодействию между иммунными клетками (такими как дендритные клетки и Т-клетки ), которые приводят к адаптивным иммунным ответам. Если HLA от донора распознается иммунной системой реципиента как отличный от собственного HLA реципиента, может быть запущен иммунный ответ против донорских тканей. Более конкретно, несовпадение HLA между донорами органов и реципиентами может привести к развитию специфических для донора антител (DSA) против HLA . DSA тесно связаны с отторжением донорских тканей у реципиента, и их присутствие считается показателем опосредованного антителами отторжения. Когда HLA донора и реципиента совпадают, донорские ткани с большей вероятностью будут приняты иммунной системой реципиента. Во время типирования ткани необходимо типировать ряд генов HLA как у донора, так и у реципиента, включая гены HLA класса I A, B и C, а также HLA класса II DRB1, Гены DRB3, DRB4, DRB5, DQA1, DQB1, DPA1 и DPB1. HLA-типирование затрудняется тем фактом, что область HLA является наиболее генетически изменчивой областью в геноме человека.
На этой диаграмме показано серологическое типирование. В верхней половине диаграммы было добавлено правильное антитело для типа HLA клетки, поэтому произошла активация комплемента, что привело к лизису клетки. Лизис клеток указывает на то, что добавленное антитело соответствует типу HLA клетки, поэтому в этом случае известен HLA-тип клетки. В нижней половине диаграммы было добавлено HLA-антитело, которое не соответствовало типу HLA клетки, поэтому не было активации комплемента и не происходил лизис клеток. Одним из первых методов тканевого типирования было серологическое типирование. В этом методе клетки донорской крови HLA типируются путем смешивания их с сывороткой, содержащей анти-HLA антитела. Если антитела распознают свой эпитоп на донорском HLA, то активация комплемента приводит к лизису клетки и гибели клеток, позволяя клеткам поглощать краситель (трипановый синий ). Это позволяет идентифицировать HLA клеток, косвенно основываясь на специфичности известных антител в сыворотке. Этот метод широко используется, поскольку он простой, быстрый и недорогой; однако огромная вариабельность аллелей HLA означает, что сыворотка, содержащая антитела, специфичные к HLA тестируемых клеток, может быть недоступна. Серологическое типирование не дает четкой картины региона HLA и не всегда приводит к успешному типированию HLA, поэтому многие лаборатории отказались от его использования в пользу более эффективных методов.
В последнее время появились другие более эффективные подходы., включая использование полимеразной цепной реакции (ПЦР ) на основе праймеров, специфичных для последовательности (SSP), или зондов, специфичных для последовательности олигонуклеотидов (SSOP). Однако SSP-PCR может потребовать как времени, так и ресурсов. SSOP-PCR лучше подходит для HLA-типирования большого числа людей, например, большого количества доноров для регистров костного мозга. RT-PCR - еще один подход к HLA-типированию, который является быстрым и универсальным, но дорогостоящим.
Опосредованный эталонной цепью конформационный анализ (RSCA) - еще один метод, используемый для типирования HLA. В этом методе образец неизвестного HLA смешивают с эталонным аллелем и обрабатывают в геле с помощью электрофореза. RSCA ограничивается количеством доступных референсных аллелей HLA, поскольку область HLA настолько разнообразна.
Прямое секвенирование ДНК в настоящее время считается лучшим методом типирования HLA, либо Сэнгером секвенирование или секвенирование следующего поколения, хотя это также может занять много времени и является одним из более дорогих методов. Секвенирование РНК также можно использовать, но многие лаборатории этого не делают поскольку РНК нестабильна и склонна к деградации.
.
