Войти
Геномное сканирование рестрикционных ориентиров ( RLGS) - это метод анализа генома для быстрой одновременной визуализации тысяч ориентиров или рестрикционных сайтов. Используя комбинацию рестрикционных ферментов, некоторые из которых специфичны для модификаций ДНК, этот метод можно использовать для визуализации различий в уровнях метилирования в геноме данного организма. RLGS использует прямую метку ДНК, которая сначала разрезается определенной серией рестрикционных ферментов, а затем метится радиоактивным изотопом (обычно фосфором-32 ). Двумерным электрофорезом процесс затем применяется, что дает результаты с высокой разрешающей способностью. Затем радиоактивному гелю второго измерения позволяют обнажить большой лист пленки. Излучение, производимое радиоактивной меткой, вызовет экспонирование пленки везде, где рестрикционные фрагменты мигрировали во время электрофореза. Затем пленка проявляется, давая визуальное представление результатов в виде авторадиографа. Одна и та же комбинация рестрикционных ферментов будет давать одинаковый образец «пятен» из образцов от одних и тех же организмов, но разные образцы для разных типов организмов. Например, ДНК человека и мыши будет давать отчетливо разные паттерны при обработке одной и той же комбинацией ферментов. Эти готовые авторадары можно сравнивать друг с другом, выявляя любые изменения в экспрессии генов, которые приводят к визуальным различиям в фильме. Каждый радиоавтограф содержит тысячи пятен, каждое из которых соответствует меченому рестрикционному ориентиру ДНК.
RLGS становится полезным при сканировании всего генома и может эффективно выполнять работу тысяч полимеразных цепных реакций одновременно. Он легко обнаруживает изменения, отклоняющиеся от нормы, и, таким образом, исключительно эффективен для выявления гипер / гипометилирования в опухолях, делеций или амплификации генов или просто изменений в экспрессии генов на протяжении всего развития организма.
