Войти
| Лабораторная диагностика вирусных инфекций | |
|---|---|
| Назначение | тест на вирусную инфекцию |
В диагностической лаборатории вирус заражения можно подтвердить множеством методов. Диагностическая вирусология быстро изменилась благодаря появлению молекулярных методов и повышенной клинической чувствительности серологических анализов.
Для вирусологического тестирования можно использовать самые разные образцы. Тип образца, отправляемого в лабораторию, часто зависит от типа диагностируемой вирусной инфекции и требуемого теста. Правильная методика отбора проб важна, чтобы избежать потенциальных преаналитических ошибок. Например, разные типы образцов необходимо собирать в соответствующие пробирки для сохранения целостности образца и хранить при соответствующих температурах (обычно 4 ° C), чтобы сохранить вирус и предотвратить рост бактерий или грибков. Иногда выборка также может производиться с нескольких сайтов.
Типы образцов включают:
Вирусы часто выделяют из исходных образец пациента. Это позволяет вырастить образец вируса в больших количествах и позволяет проводить на нем большее количество тестов. Это особенно важно для образцов, содержащих новые или редкие вирусы, диагностические тесты для которых еще не разработаны.
Многие вирусы можно выращивать в культуре клеток в лаборатории. Для этого образец вируса смешивается с клетками. Этот процесс называется адсорбцией, после чего клетки становятся заражены и производят больше копий вируса. Хотя разные вирусы часто растут только в определенных типах клеток, есть клетки, которые поддерживают рост большого разнообразия вирусов и являются хорошей отправной точкой, например африканская обезьяна линия клеток почек (клетки Vero ), фибробласты легких человека (MRC-5 ) и клетки эпидермоидной карциномы человека (HEp-2 ). Одним из способов определения того, успешно ли клетки реплицируют вирус, является проверка изменения морфологии клеток или наличия гибели клеток с помощью микроскопа.
Для роста других вирусов могут потребоваться альтернативные методы, такие как инокуляция куриных яиц с эмбрионами (например, вирусы птичьего гриппа ) или внутричерепная инокуляция вируса с использованием новорожденных мышей (например, лиссавирусов ).
Молекулярные методы являются наиболее специфическими и чувствительными диагностическими тестами. Они способны обнаруживать либо весь вирусный геном, либо части вирусного генома. В прошлом тесты на нуклеиновую кислоту в основном использовались в качестве вторичного теста для подтверждения положительных серологических результатов. Однако по мере того, как они становятся более дешевыми и автоматизированными, они все чаще становятся основным инструментом диагностики.
Обнаружение вирусных РНК и ДНК-геномов можно проводить с помощью полимеразной цепной реакции. Этот метод создает множество копий вирусного генома с помощью вирус-специфичных зондов. Варианты ПЦР, такие как вложенная ПЦР с обратной транскриптазой и ПЦР в реальном времени, также могут быть использованы для определения вирусной нагрузки в сыворотке крови пациента. Это часто используется для отслеживания успеха лечения в случаях ВИЧ.
Секвенирование - единственный метод диагностики, который позволяет получить полную последовательность вирусного генома. Следовательно, он предоставляет больше всего информации об очень небольших различиях между двумя вирусами, которые будут выглядеть одинаково при использовании других диагностических тестов. В настоящее время он используется только тогда, когда требуется такая глубина информации. Например, секвенирование полезно при тестировании конкретных мутаций у пациента для определения противовирусной терапии и восприимчивости к инфекции. Однако по мере того, как тесты становятся дешевле, быстрее и автоматизированнее, секвенирование, вероятно, станет основным диагностическим инструментом в будущем.
Иммунофлуоресценция или иммунопероксидаза обычно используются для определения наличия вируса в образце ткани. Эти тесты основаны на том принципе, что если ткань инфицирована вирусом, антитело, специфичное к этому вирусу, сможет связываться с ним. Для этого к образцу ткани примешивают антитела, специфичные к разным типам вирусов. После того, как ткань подвергается воздействию света определенной длины волны или химического вещества, которое позволяет визуализировать антитело.
Для этих тестов требуются специализированные антитела, которые производятся и покупаются у коммерческих компаний. Эти коммерческие антитела обычно хорошо охарактеризованы и, как известно, связываются только с одним конкретным типом вируса. Они также связаны со специальной меткой, которая позволяет визуализировать антитело в лаборатории, то есть излучать флуоресценцию или цвет. Следовательно, иммунофлуоресценция относится к обнаружению флуоресцентных антител (иммуно), а иммунопероксидаза относится к обнаружению окрашенных антител (пероксидаза дает темно-коричневый цвет).
| Иммунофлуоресцентный анализ | Иммунопероксидазный анализ |
|---|---|
Электронная микроскопия - это метод, с помощью которого можно сфотографировать весь вирус и выявить его форму и структуру. Обычно он не используется в качестве стандартного диагностического теста, поскольку требует высокоспециализированной подготовки проб, микроскопа и технических знаний. Однако электронная микроскопия очень универсальна из-за ее способности анализировать любой тип образца и идентифицировать любой тип вируса. Таким образом, он остается золотым стандартом для выявления вирусов, которые не обнаруживаются при рутинных диагностических тестах или для которых рутинные тесты дают противоречивые результаты.
 Электронная микроскопия сапповируса |
Человек человек, который недавно был инфицирован вирусом, вырабатывает в кровотоке антитела, которые распознают этот вирус. Это называется гуморальным иммунитетом. Важны два типа антител. Первый под названием IgM очень эффективен при нейтрализации вирусов, но вырабатывается клетками иммунной системы только в течение нескольких недель. Второй, называемый, IgG вырабатывается неопределенно долго. Таким образом, наличие IgM в крови хозяина используется для проверки на острую инфекцию, тогда как IgG указывает на инфекцию, которая произошла когда-то в прошлом. Оба типа антител измеряются при проведении тестов на иммунитет.
Тестирование антител стало широко доступным. Это можно сделать для отдельных вирусов (например, с помощью анализа ELISA), но все более распространенными становятся автоматизированные панели, которые могут одновременно проверять множество вирусов.
Некоторые вирусы прикрепляются к молекулам, присутствующим на поверхности эритроцитов, например вирусу гриппа. Следствием этого является то, что при определенных концентрациях вирусная суспензия может связывать вместе (агглютинат ) эритроциты, предотвращая их выпадение из суспензии.
