Войти
Гемоцитометр . Два полуотражающих прямоугольника - это счетные камеры. 
Загрузка камеры 
Сетка гемоцитометра (см. Таблицу) Гемоцитометр (или гемоцитометр) - это устройство с счетной камерой, изначально разработанное и обычно используется для подсчета клеток крови.
Гемоцитометр был изобретен Луи-Чарльзом Малассезом и состоит из толстого стекла предметного стекла с прямоугольным углублением, которое создает точный объем камера. Эта камера имеет гравированную лазером сетку перпендикулярных линий. Устройство тщательно продумано так, чтобы была известна площадь, ограниченная линиями, и глубина камеры. Таким образом, наблюдая за определенной областью сетки, можно подсчитать количество ячеек или частиц в определенном объеме жидкости и, таким образом, рассчитать концентрацию ячеек во жидкости в целом. Хорошо используемым типом гемоцитометра является счетная камера Нойбауэра.
Для различных целей используются другие типы гемоцитометров с другими линейками. Постановления Фукса-Розенталя, обычно используемые для подсчета спинномозговой жидкости, постановления Говарда Молда, используемые для определения плесени на пищевых продуктах и упаковках пищевых продуктов, постановления Макмастера на слайде для яиц, используемые для подсчета микробных яиц в фекалиях, постановление камеры Наджотта для подсчета низких уровней лейкоцитов в белом компоненты тромбоцитов с пониженным содержанием клеток, Palmer Nanoplankton управляет для подсчета меньших планктонов. Счетчик Петрова-Хауссера, использующий улучшенные линейки Нойбауэра, используется для подсчета бактерий и сперматозоидов и предлагается с переменной глубиной камеры. Клетка Седжвика-Рафтера, управляющая гемоцитометром, в первую очередь предназначена для использования в микроскопии питьевой воды.
Сетчатая область Усовершенствованный гемоцитометр с линейкой Нойбауэра состоит из девяти квадратов 1 x 1 мм (1 мм). Они подразделяются на три направления; 0,25 x 0,25 мм (0,0625 мм), 0,25 x 0,20 мм (0,05 мм) и 0,20 x 0,20 мм (0,04 мм). Центральный квадрат подразделяется на квадраты 0,05 x 0,05 мм (0,0025 мм). Поднятые края гемоцитометра удерживают покровное стекло на 0,1 мм от размеченной сетки, придавая каждому квадрату определенный объем (см. Рисунок справа).
| Размеры | Площадь | Объем при 0,1 мм глубина |
|---|---|---|
| 1 x 1 мм | 1 мм | 100 нЛ |
| 0,25 x 0,25 мм | 0,0625 мм | 6,25 нЛ |
| 0,25 x 0,20 мм | 0,05 мм | 5 nL |
| 0,20 x 0,20 мм | 0,04 мм | 4 nL |
| 0,05 x 0,05 мм | 0,0025 мм | 0,25 нл |
Для использования гемоцитометра сначала убедитесь, что специальное покровное стекло, входящее в состав счетной камеры, правильно расположено на поверхности счетной камеры. Когда две стеклянные поверхности находятся в надлежащем контакте , можно наблюдать кольца Ньютона. Если это так, суспензию клеток наносят на край покровного стекла, чтобы засасывать его в пустоту за счет капиллярного действия, которое полностью заполняет камеру образцом. Количество клеток в камере можно определить прямым подсчетом с использованием микроскопа, а визуально различимые клетки можно подсчитать по-разному. Количество клеток в камере используется для расчета концентрации или плотности клеток в смеси, из которой взят образец. Это количество клеток в камере, деленное на объем камеры, который известен с самого начала с учетом любых разбавлений и сокращений подсчета:
где объем разбавленной пробы (после разбавления), деленный на объем исходной смеси в пробе (до разбавления), составляет коэффициент разбавления. Например, если объем исходной смеси составлял 20 мкл и она была разбавлена один раз (путем добавления 20 мкл разбавителя), то второй член в скобках равен 40 мкл / 20 мкл. Объем подсчитываемых квадратов соответствует тому, который указан в таблице вверху, в зависимости от размера (см. Рисунок справа). Подсчитанное количество ячеек - это сумма всех ячеек, подсчитанных по квадратам в одной камере. Пропорция подсчитанных ячеек применяется, если подсчитываются не все внутренние квадраты в пределах установленного квадрата (т.е. если подсчитываются только 4 из 20 в угловом квадрате, то этот член будет равен 0,2).
Детали гемоцитометра (если смотреть сбоку) идентифицированы. Для большинства приложений используются только четыре больших угловых квадрата. Подсчитываются клетки, которые находятся на верхней и левой линиях или касаются их, но те, которые находятся на правой или нижней линиях или касаются их, игнорируются.
Пустая сетка гемоцитометра при 100-кратном увеличении. Исходная суспензия должна быть тщательно перемешана перед взятием пробы. Это гарантирует, что образец является репрезентативным, а не просто артефактом конкретной области исходной смеси, из которой он был взят.
Следует использовать соответствующее разведение смеси с учетом количества клеток, подлежащих подсчету. Если образец недостаточно разбавлен, клетки будут переполнены, и их будет трудно подсчитать. Если он слишком разбавлен, размера образца будет недостаточно, чтобы сделать строгие выводы о концентрации в исходной смеси.
Результаты можно сравнить, выполнив повторный тест на второй камере. Если они отличаются более чем в 2 раза на ошибку подсчета (квадратный корень из подсчета), метод отбора пробы может быть ненадежным (например, исходная смесь не была тщательно перемешана).
Счетная камера должна быть заполнена капиллярным путем после того, как крышка камеры (специальное покровное стекло сертифицированной толщины и плоскостности) была установлена на место. Это позволяет избежать риска осаждения / прилипания клеток к стеклу или испарения некоторого объема до того, как покровное стекло будет помещено сверху, что приведет к завышенной оценке концентрации клеток. Седиментация представляет собой меньшую проблему с бактериями, но испарение, которое более распространено в лабораториях с кондиционированным воздухом с низкой влажностью, по-прежнему необходимо минимизировать.
