Войти
Диацетат флуоресцеина (FDA ) анализы гидролиза можно использовать для измерения ферментативной активности микробов в образце. Создается яркое желто-зеленое свечение, которое становится наиболее сильным при максимальной активности ферментов. Это можно количественно оценить с помощью спектрофлуориметра.
Гидролиз FDA часто используется для измерения активности в образцах почвы и компоста; однако он может не дать точных показаний, если микробы с более низкой фазой активности, такие как эстеразы, сначала расщепляют флуоресцеин.
Он также используется в комбинации с иодидом пропидия (PI) для определения жизнеспособности в эукариотических клетках. Живые клетки будут активно преобразовывать нефлуоресцентный FDA в зеленое флуоресцентное соединение флуоресцеин, признак жизнеспособности; в то время как ядра клеток с нарушенной мембраной будут флуоресцировать красным цветом, что является признаком гибели клетки. В настоящее время окрашивание FDA / PI является стандартной оценкой жизнеспособности островков поджелудочной железы человека с точки зрения пригодности для трансплантации, когда показатель жизнеспособности превышает 70%.
Исходный раствор FDA готовят растворением 5 мг диацетата флуоресцеина в 1 мл ацетона, и сахарозу можно добавить для живых клеток. проверка жизнеспособности. Пятно FDA должно храниться в темноте при 4 ° C, иначе оно испортится.
3. «Анализ гидролиза диацетата флуоресцеина» http://www.eeescience.utoledo.edu/Faculty/Sigler/Von_Sigler/LEPR_Protocols_files/FDA%20assay.pdf
.
