Войти
| Тест на денатурацию щелочью | |
|---|---|
| Цель | дифференцировать новорожденный из материнской крови |
тест на денатурацию щелочью, также известный как A или тест Apt, представляет собой медицинский тест, используемый для дифференциации плода или неонатальная кровь из материнской крови, обнаруженная в стуле или рвоте новорожденного, или из материнской вагинальной крови.
Тест был разработан Леонардом Аптом (1922–2013), американским детским офтальмологом. Изначально тест использовался для определения источника кровянистого стула у новорожденных. Он был модифицирован, чтобы отличать плодный гемоглобин от материнского в образцах крови из любого источника.
Тест Apt чаще всего используется в случаях вагинального кровотечения на поздних сроках беременности (дородовой период кровоизлияние ), чтобы определить, происходит ли кровотечение от матери или плода.
На практике тест Apt нельзя проводить при подозрении на предлежание сосудов, поскольку время до коллапса плода с кровотечением из предлежания сосудов часто бывает очень коротким.
Тест Apt также можно использовать для обнаружения присутствия крови плода в кровотоке матери в случаях подозрения на кровоизлияние у плода и матери. Поскольку этот тест является только качественным определением наличия гемоглобина плода в крови матери, чаще используется количественный тест Клейхауэра-Бетке.
Наконец, тест Apt можно использовать после рождения (послеродовое кровотечение ), если у новорожденного наблюдается кровавая рвота, кровянистый стул или активное кровотечение из назогастрального зонда. Положительный результат теста на меткость означает, что кровь поступила из желудочно-кишечного или легочного кровотечения новорожденного. Отрицательный тест на Apt указывает на то, что кровь имеет материнское происхождение, предполагая, что новорожденный проглотил или аспирировал материнскую кровь во время родов или во время кормления грудью (например, из трещин груди).
Тест основан на различиях между материнским и плодным гемоглобином. Материнская кровь содержит взрослый гемоглобин, состоящий из двух альфа- и двух бета-субъединиц (он же гемоглобин А или HbA, то есть нормальный взрослый гемоглобин). Кровь плода содержит гемоглобин плода, состоящий из двух альфа- и двух гамма-субъединиц (он же гемоглобин F или HbF, т.е. нормальный гемоглобин плода). Это различие в составе придает различным типам гемоглобина разные химические свойства (в дополнение к более высокому сродству HbF к растворенному в крови кислороду по сравнению с HbA, что позволяет ребенку извлекать кислород из крови матери). Гемоглобин плода устойчив к щелочной (основной) денатурации, тогда как гемоглобин взрослого человека подвержен такой денатурации. Следовательно, воздействие гидроксида натрия (NaOH ) на образец крови денатурирует гемоглобин взрослого человека, но не гемоглобин плода. Гемоглобин плода под микроскопом будет иметь розоватый цвет, а гемоглобин взрослого - желто-коричневатый.
Кровь смешивают с небольшим количеством стерильной воды, чтобы вызвать гемолиз эритроцитов с образованием свободного гемоглобина. Затем образец центрифугируется в течение нескольких минут. Затем супернатант, содержащий розовый гемоглобин, смешивают с 1 мл 1% NaOH на каждые 5 мл супернатанта. Цвет жидкости оценивается через 2 минуты. Гемоглобин плода останется розовым, а гемоглобин взрослого станет желто-коричневым, поскольку гемоглобин взрослого человека менее стабилен и преобразуется в гематин, который имеет гидроксидный лиганд.
