Войти
Аналитическое ультрацентрифугирование - это аналитический метод, сочетающий ультрацентрифугу с системами оптического мониторинга.
Аналитическая ультрацентрифуга. Похоже, это Spinco Model E. Это ранний инструмент, вероятно, датируемый 1950-ми годами. Оператор сидит перед камерой для образцов, его левая рука касается ротора. Во время работы камера будет закрыта бронированным кожухом и откачана до вакуума. Кожух был опущен, чтобы обеспечить доступ для загрузки или разгрузки ротора. В аналитической ультрацентрифуге (обычно сокращенно AUC) профиль осаждения образца отслеживается в реальном времени с помощью оптической системы обнаружения. Образец обнаруживается с помощью системы, чувствительной к поглощению ультрафиолетового света и / или интерференционному оптическому показателю преломления. Таким образом, оператор может наблюдать изменение концентрации пробы в зависимости от оси профиля вращения в результате приложенного центробежного поля. С помощью современных приборов эти наблюдения оцифровываются в электронном виде и сохраняются для дальнейшего математического анализа.
Информация, которую можно получить с помощью аналитической ультрацентрифуги, включает общую форму макромолекул, конформационные изменения в макромолекулах и распределение макромолекул по размерам. С помощью AUC можно получить информацию о количестве и субъединице стехиометрии не- ковалентных комплексов и константе равновесия константах макромолекул, таких как белки, ДНК, наночастицы или другие сборки из разных классов молекул.
Аналитическое ультрацентрифугирование в последнее время стало широко использоваться из-за большей простоты анализа с помощью современных компьютеров и разработки программного обеспечения, в том числе пакета программного обеспечения SedFit, поддерживаемого Национальными институтами здравоохранения.
Роторы для аналитической ультрацентрифуги для максимальной скорости вращения 50 '000 (слева) и 60 000 (справа) об / мин. Аналитическая ультрацентрифуга расширяет ультрацентрифугу за счет источника света и оптических детекторов. Чтобы свет проходил через аналит во время ультрацентрифуги, требуются специализированные клетки, которые должны соответствовать оптическим свойствам, а также противостоять силам гравитации. Каждая ячейка состоит из корпуса, двух окон из кварцевого стекла, центрирующего элемента с двумя секторами. Эти ячейки помещаются в ротор с проходным отверстием.
.
Применяя специальное оборудование и адаптируя параметры измерения, можно проводить несколько типов экспериментов. Наиболее распространенные эксперименты с AUC - это эксперименты со скоростью седиментации и равновесием седиментации.
Эксперименты со скоростью седиментации позволяют определить форму и молярную массу аналитов, а также их распределение по размерам. Разрешение по размеру этого метода приблизительно пропорционально квадрату радиусов частиц, и, регулируя скорость ротора в эксперименте, можно охватить диапазон размеров от 100 Da до 10 GDa. Эксперименты по скорости седиментации также могут быть использованы для изучения обратимого химического равновесия между макромолекулярными частицами, либо путем мониторинга количества и молярной массы макромолекулярных комплексов, либо путем сбора информации о сложном составе из многосигнального анализа с использованием различий в спектральном сигнале каждого компонента, либо путем следуя зависимости скорости осаждения макромолекулярной системы от состава, как описано в.
Целью эксперимента является отслеживание седиментации при фиксированной угловой скорости.
Эксперименты по седиментационному равновесию сообщают о молярной массе аналитов и константах химического равновесия.
Они связаны с регулировкой скорости вращения ротора таким образом, чтобы формировался стационарный профиль концентрации c (r) образца в ячейке, где седиментация и диффузия компенсируют друг друга.
