Войти
Высаливание (также известное как осаждение, вызванное солью, фракционирование соли, кристаллизация против растворителя, кристаллизация в осадке, или затопление ) - это эффект, основанный на взаимодействии электролит и неэлектролит, в котором неэлектролит может быть менее растворимым при высоких концентрациях соли. Он используется как метод очистки от белков, а также для предотвращения денатурации белков из-за чрезмерно разбавленных образцов во время экспериментов. Концентрация соли, необходимая для того, чтобы белок преципитировал из раствора, отличается от белка к белку. Этот процесс также используется для концентрирования разбавленных растворов белков. При необходимости для удаления соли можно использовать диализ.
Солевые соединения диссоциируют в водных растворах. Это свойство эксплуатируется в процессе высаливания. Когда концентрация соли увеличивается, некоторые молекулы воды притягиваются ионами соли, что уменьшает количество молекул воды, доступных для взаимодействия с заряженной частью белка.
В молекулах белка содержатся гидрофобные аминокислоты и гидрофильные аминокислоты. После сворачивания белка в водном растворе гидрофобные аминокислоты обычно образуют защищенные гидрофобные области, в то время как гидрофильные аминокислоты взаимодействуют с молекулами сольватации и позволяют белкам образовывать водородные связи с окружающими молекулами воды. Если достаточная часть поверхности белка является гидрофильной, белок можно растворить в воде.
Когда к раствору добавляют соль, происходит более частое взаимодействие между молекулами растворителя и ионами соли. В результате ионы белка и соли конкурируют за взаимодействие с молекулами растворителя, в результате чего становится меньше молекул растворителя, доступных для взаимодействия с молекулами белка, чем раньше. Таким образом, взаимодействия белок-белок становятся сильнее, чем взаимодействия растворитель-растворенное вещество, и молекулы белка связываются, образуя гидрофобные взаимодействия друг с другом. После диссоциации в данном растворителе отрицательно заряженные атомы выбранной соли начинают конкурировать за взаимодействия с положительно заряженными молекулами, присутствующими в растворе. Точно так же положительно заряженные катионы конкурируют за взаимодействия с отрицательно заряженными молекулами растворителя. Этот процесс известен как высаливание.
Мыла легко осаждаются концентрированным раствором соли, ион металла в соли реагирует с жирными кислотами, образующими мыло, и глицерин.
Поскольку разные белки имеют разные составы аминокислот, разные белковые молекулы осаждаются при разных концентрациях солевого раствора.
Нежелательные белки можно удалить из смеси белкового раствора путем высаливания, если известна растворимость белка в различных концентрациях солевого раствора. После удаления осадка с помощью фильтрации или центрифугирования желаемый белок может быть осажден путем изменения концентрации соли до уровня, при котором желаемый белок становится нерастворимым.
Одним из недостатков высаливания при очистке белков является то, что помимо осаждения конкретного представляющего интерес белка также осаждаются примеси. Таким образом, для получения более чистого представляющего интерес белка могут потребоваться дополнительные методы очистки, такие как ионообменная хроматография.
