Войти
| Вирус картофеля Y | |
|---|---|
Классификация вирусов  | |
| (без рейтинга): | Вирус |
| Область: | Рибовирия |
| Царство: | Orthornavirae |
| Тип: | Pisuviricota |
| Класс: | Stelpaviricetes |
| Отряд: | Patatavirales |
| Семья: | Potyviridae |
| Род: | Potyvirus |
| Вид: | Вирус картофеля Y |
| Синонимы | |
вирус мозаики бринджала. вирус дурмана 437. вирус акропетального некроза картофеля. вирус тяжелой мозаики картофеля. Вирус полосатости жилок табака | |
Вирус Y картофеля (PVY) является патогенным вирусом растений семейства Potyviridae и одним из наиболее важных вирусов растений, поражающим производство картофеля.
Заражение растений картофеля PVY приводит к множеству симптомов в зависимости от вирусного штамма. Самым легким из этих симптомов является потеря продуктивности, но наиболее опасным является «кольцевая некротическая болезнь клубней картофеля» (PTNRD). Некротические кольцевые пятна делают картофель непригодным для продажи и, следовательно, могут привести к значительной потере дохода. PVY передается переносчиками тли, но также может оставаться неактивным в семенном картофеле. Это означает, что использование одной и той же линии картофеля для выращивания семенного картофеля в течение нескольких последовательных поколений приведет к прогрессивному увеличению вирусной нагрузки и последующей потере урожая.
Росту зараженности растений картофеля вирусами за последние несколько лет привел к значительным потерям для картофельной промышленности Южной Африки. Повышенный уровень инфицирования можно объяснить несколькими факторами. К ним относятся заметное снижение эффективности и применения химикатов, используемых для борьбы с переносчиками болезней, использование зараженного семенного картофеля при выращивании, неправильный орошение и методы ведения сельского хозяйства, а также отсутствие чувствительного, быстрого и надежного метода обнаружения. Повышение средней температуры зимы вследствие глобального потепления также привело к увеличению численности тли, что, в свою очередь, привело к увеличению распространения вирусов.
Картофель, иллюстрирующий некротическую кольцевую пятнистость PVY принадлежит к роду Potyvirus, членом которого он является. Потивирус - самый крупный род вирусов растений и, возможно, самый разрушительный для посевов картофеля. Род включает более 200 видов, которые приносят значительные убытки в сельскохозяйственной сфере. PVY поражает многие хозяйственно важные виды растений. К ним относятся картофель (Solanum tuberosum), табак (Nicotiana tabacum), помидор (Solanum lycopersicum) и перец (Capsicum виды). Уровень повреждения сельскохозяйственных культур определяется штаммом PVY, поражающим растения, вирусной нагрузкой, временем возникновения инфекции, а также толерантностью хозяина к вирусу. Устойчивость хозяев к инфекции PVY во многих случаях низкая. Заражение поля картофеля PVY может в конечном итоге привести к потере урожая на 10-100%.
Было показано, что PVY имеет разные изоляты в зависимости от симптомов, которые они вызывают у различных видов растений картофеля. Обширная биологическая, серологическая и молекулярная вариабельность изолятов PVY делает особенно трудной классификацию изолятов как конкретных штаммов. Возникновение различных симптомов и появление некротической PVY привело к поиску более надежных инструментов классификации, чем простая серологическая идентификация. Традиционно выделяют три основных сорта PVY: PVY, PVY и PVY. PVY, первоначально известный как вирус картофеля C, был первым, который был обнаружен и был идентифицирован в 1930-х годах. PVY вызывает гиперчувствительные реакции у широкого ряда сортов картофеля. Эти реакции включают образование мягких мозаичных узоров или точечных полос. В отличие от других штаммов PVY, некоторые штаммы PVY не передаются тлей. Предыдущие исследования Visser et al. не идентифицировал ни один из местных изолятов как PVY, но, как сообщалось, встречался в Южной Африке. Второй штамм PVY - это PVY. Некоторые заметки о предполагаемом варианте вируса Solanum 2 (вирус картофеля Y). Этот штамм был описан у растений табака, растущих рядом с растениями картофеля. PVY приводит к некрозу листьев и легкому повреждению клубней или его отсутствию. Обычный штамм PVY обозначается как PVY. Заражение растения картофеля штаммом PVY приводит к легкому повреждению клубней и не вызывает некроза листьев. И PVY, и PVY передаются тлями и встречаются в Южной Африке. В Европе было показано, что эти два штамма рекомбинируют с образованием PVY. PVY имеет аккредитацию на способность вызывать некротическую кольцевую пятнистость клубней картофеля (PTNRD). Клубни, поврежденные PTNRD, становятся неликвидными, и заражение PVY, таким образом, приводит к большему экономическому ущербу, чем заражение другими штаммами.
PVY может передаваться растениям картофеля посредством прививки, инокуляции сока растений и передачи тлей. Наиболее распространенный способ заражения PVY растительного материала в полевых условиях - через тлю, и хотя тля сама по себе может напрямую повредить растения картофеля, именно их роль как вирусных переносчиков имеет наибольшее экономическое воздействие. В холодном климате тля зимует либо как бескрылая тля, рождающая живых детенышей (viviparae), либо как яйца. Такие растения-хозяева, как сорняки и другие культуры, служат рассадниками этой тли и образуют временную зону колонизации до того, как тля мигрирует на картофельные поля. Считается, что в умеренном климате, например в Южной Африке, тля бесполым образом размножается на сорняках, других культурах, местных и садовых растениях. Это означает, что некоторое количество тлей присутствует круглый год. Важность эффективного и строгого мониторинга популяций тлей подчеркивается в обзоре Рэдклиффа и Рэгсдейла (2002), поскольку вирионы PVY попадают на картофельные поля почти исключительно крылатыми тлями из источника вируса за пределами этих полей. Бескрылая тля еще не была связана с распространением PVY на картофельных полях.
Зеленая персиковая тля (Myzus persicae ) оказалась наиболее эффективной в своей роли вирусного переносчика, но другие, такие как Aphis fabae, Aphis gossypii, Aphis nasturtii, Macrosiphum euphorbiae, Myzus (Nectarosiphon) certus, Myzus (Phorodon) humuli и Rhopalosiphum insertum, также сильно связаны с вирусной передачей. Совет сельскохозяйственных исследований - Институт овощей и декоративных растений (ARC-VOPI) 6 из Южной Африки идентифицировал двадцать пять видов тлей, способных функционировать как переносчики PVY. Также была установлена эффективность некоторых из этих тлей в качестве переносчиков PVY (Ragsdale et al., 2001), и было обнаружено, что они различаются у разных видов. В Южной Африке наиболее распространенными и эффективными переносчиками PVY, обнаруженными в полевых условиях, являются Aphis fabae, Aphis gossypii и Aphis nasturtii. Помимо классификации по эффективности в качестве переносчиков, тлей также можно разделить на две подгруппы, а именно, колонизирующие и неколонизирующие виды. Колонизирующие тли - это тли, которые размножаются и приживаются на растениях картофеля, в частности, в то время как неколонизирующие тли не размножаются и не создают колоний на растениях картофеля. Колонизирующие тли лучше приспособлены к жизни на растениях картофеля и поэтому обычно считаются лучшими переносчиками PVY, чем неколонизирующие тли. Неколонизирующие тли не питаются в первую очередь растениями картофеля, но иногда питаются ими в поисках более подходящего хозяина. Их более низкая эффективность как вектора PVY нивелируется огромным количеством, в котором они встречаются. По этой причине все тли, присутствующие на картофельных полях и вокруг них, должны рассматриваться как возможные переносчики, а их численность должна тщательно контролироваться.
Передача PVY тлей происходит непостоянным, не циркулирующим образом, что предполагает менее тесное взаимодействие между вирионом и вектором, чем в случае циркулирующих вирионов. Тот факт, что вирионы передаются непостоянным образом, означает, что вирусная репликация не происходит внутри вектора тли и что, если тля не питается инфицированными растениями, она теряет способность инфицировать растения после двух-трех кормлений. Вирионы прикрепляются к стилету тли за считанные секунды и могут оставаться заразными в течение четырех-семнадцати часов. Расстояние, на которое могут передаваться вирионы, ограничено из-за короткого периода, в течение которого они остаются заразными. Хотя короткая продолжительность жизни вне растений препятствует передаче вируса на большие расстояния, это не снижает эффективность передачи, обеспечиваемую быстрым проникновением вируса и инокуляцией в поле.
Попадая в растительную клетку, белок оболочки вируса разбирается и высвобождает свой геном РНК. Вирусная РНК служит мРНК, и, хотя о ее трансляции известно немного, считается, что некодирующая 5’-область функционирует как усилитель трансляции. Транслируемая мРНК приводит к образованию полипротеина, который превращается в зрелые белки. Затем каждый полипротеин расщепляется на десять различных белков, которые считаются многофункциональными. Эти белки вместе с белками хозяина собираются в репликационный комплекс. Этот комплекс выполняет синтез отрицательной цепи РНК, используя положительную цепь вирусной РНК в качестве матрицы. После создания дополнительных копий РНК они кодируют синтез различных белков, как упоминалось ранее, а также белков оболочки. Эти белки оболочки теперь будут охватывать вновь сформированные геномы, давая начало новым вирионам. Было высказано предположение, что вложение вновь образованных вирионов инициируется взаимодействием белков оболочки с 5’-концом и что белок оболочки накапливается к 3’-концу. Весь процесс репликации вируса происходит внутри эндоплазматического ретикулума. Эти вновь синтезированные вирусные частицы впоследствии транспортируются через плазмодесмы к соседним клеткам растений с помощью нескольких вспомогательных белков потивируса. Распространение вирусов внутри растения происходит в соответствии с соотношением источник-поглотитель между созревающими и растущими тканями. Концентрация вируса по всему растению высока, и это значительно увеличивает вероятность поглощения тлей. Заражение растений потивирусами может иметь различные симптомы. Инфекция может включать некроз жилок, мозаичные симптомы, а также деформацию листьев (Boonham et al., 2002). Зараженные растения, которые не проявляют симптомов, могут иметь зараженный полог, и из них будут получены продукты более низкого качества, чем их здоровые аналоги.
Поскольку PVY вызывает большие потери в производстве картофеля, исследования взаимодействия картофеля с вирусом Y картофеля очень важны. Чувствительные сорта картофеля реагируют на прививку PVY развитием типичных симптомов. На инокулированных листьях через 5-7 дней после инокуляции развиваются хлоротичные и некротические кольцевые пятна. По мере распространения вируса по растению на неинокулированных листьях развиваются системные симптомы. Через 10 дней после инокуляции появляются морщины и мозаичный хлороз, что приводит к появлению пальмы (опадание листьев).
Вирусные защитные механизмы растений в первую очередь будут пытаться ограничить движение вируса. В противном случае он может попытаться вызвать гибель клеток в инфицированной ткани, тем самым предотвращая распространение вирионов. Хотя точный механизм индукции заболевания потивирусами у растений неизвестен, известно, что эти вирусы вызывают значительное прекращение экспрессии генов-хозяев во время репликации вируса.
Физиологические изменения в растениях картофеля в ответ на инфекцию PVY были интенсивно изучается. Было показано, что на ранних стадиях инфекции, то есть в первые 12 часов, гены, связанные с фотосинтезом, гены, участвующие в восприятии, передаче сигналов и защитной реакции, экспрессируются по-разному. Через 24 часа после инокуляции количество салициловой кислоты увеличивалось.
Нарушение экспрессии генов нарушает нормальную клеточную функцию клеток, что может быть причиной физических симптомов, которые демонстрирует растение. Во время развития симптомов исследование взаимодействия между восприимчивым сортом картофеля и PVY показало изменения в уровне цитокининов. В инокулированных листьях были обнаружены симптомы изменения структуры и размера хлоропластов, более низкие уровни хлорофилла и дифференциальная активность растворимых и ионно связанных пероксидаз.
На более поздних стадиях заражения PVY концентрация общего белка увеличивалась у чувствительных сортов картофеля, тогда как у толерантных и умеренно толерантных сортов картофеля таких выраженных изменений не наблюдалось. Исследования экспрессии генов выявили изменения в экспрессии генов белков теплового шока, каталазы, β-1,3-глюканазы и генов, участвующих в фотосинтезе.
вирионов Potyvirus состоят из нитевидных структур без оболочки, длина которых составляет 680-900 нм, а ширина - 11-15 нм. Морфологически капсид потивируса состоит примерно из 2000 копий белка оболочки (CP).
Капсид инкапсулирует одну цепь положительной смысловой РНК, которая находится в следующем порядке: длиной 10 т.п.н. и имеет нетранслированную 5'-концевую область (5'-NTR), а также 3'-поли-A-хвост. Геном с положительным смыслом содержит одну расширенную открытую рамку считывания и действует непосредственно как мРНК. 144 нуклеотидный 5’-NTR особенно богат остатками аденина и имеет очень мало остатков гуанина. В отличие от традиционной кэп-структуры, 5'NTR связан с белком, связанным с вирусным геномом (VPg ), который, как говорят, действует как усилитель транскрипции.
5'-лидер Последовательность имеет внутренний сайт входа в рибосому (IRES) и независимые от кепки регуляторные элементы трансляции (CIRE). IRES управляет независимой от кэп трансляцией посредством механизма, аналогичного используемому эукариотами. Расширенная открытая рамка считывания кодирует полипротеин 350 кДа. Этот полипротеин протеолитически процессируется вирусными протеазами (NIa, HC-Pro и P1) и подвергается ко- и посттрансляционному расщеплению с образованием нескольких многофункциональных белков. К ним относятся следующие: P1 (белок P1), HCPro (протеиназа вспомогательного компонента), P3 (белок P3), 6K1 (белок 1 6 кДа), CI (цилиндрическое включение), 6K2 (белок 2 6 кДа), VPg (вирусный белок, связанный с геномом), NIaPro (ядерный белок включения a, домен протеиназы), NIb (ядерный белок включения b) и CP (белок оболочки).
В прошлом посевы проверяли визуально, чтобы определить, свободны ли они от болезней. Визуальный осмотр также использовался в качестве основы для сертификации семян. Определить вирусный статус путем визуального осмотра невероятно сложно, поскольку симптомы могут быть замаскированы или инфекция скрыта. В результате были введены послеродовые испытания и проверки. Эти испытания включали выращивание ранее собранного материала в теплицах. Полученные в результате растения проверяли для более точной оценки вирусного статуса. Хотя этот метод скрининга действительно предлагал некоторую степень мониторинга вирусного присутствия, он был субъективным и крайне неэффективным. Иммуноферментный анализ (ELISA) Скрининг сельскохозяйственных культур и семенного картофеля заменил визуальный осмотр в начале 1970-х годов. Использование ELISA дало рутинным диагностическим лабораториям быстрый, эффективный и чувствительный метод скрининга на широкий спектр вирусов растений картофеля.
Обнаружение патогенов с помощью ELISA основывается на взаимодействии между антигеном и специфическими антителами и стало популярным и экономичным средством рутинного обнаружения. В ELISA твердую фазу можно покрыть исследуемым образцом, содержащим антиген. Эффективность связывания антигена с твердой фазой зависит от температуры, продолжительности воздействия, а также от концентрации. Используемые твердые фазы включают нитроцеллюлозные мембраны, бумагу, стекло, агарозу и полистирол или поливинилхлоридные микротитровальные планшеты. Планшеты для микротитрования являются наиболее широко используемыми твердофазными планшетами, поскольку с ними легко обращаться, их можно автоматизировать и проводить анализ с использованием ридеров для микротитровальных планшетов. Недостатком этих планшетов является то, что они обладают высокой абсорбцией, что увеличивает частоту неспецифического связывания компонентов, используемых в ELISA. Неспецифическое связывание с планшетами снижается за счет использования буферов, содержащих белки, такие как казеин, и неионогенные детергенты, такие как Tween 20. После нанесения покрытия избыток образца удаляется, и планшет обычно обрабатывается 1% раствором казеина. После этого твердую фазу обрабатывают антителами против интересующего антигена. После каждого этапа инкубации планшет промывают Твин 20, содержащим PBS. Эти этапы промывки предназначены для смывания любых неспецифически связанных компонентов. Неспецифически связанные компоненты связаны менее прочно, чем специфически связанные. Обнаружение достигается либо путем добавления антитела, связанного с ферментом, либо путем добавления и обнаружения биотинилированного антитела. В системе, в которой используется связанное с ферментом антитело, последующее добавление соответствующего субстрата приводит к образованию цвета, пропорционального количеству антигена. Альтернативно планшет может быть покрыт антителом с последующей инкубацией с образцом, который должен быть обнаружен. Это, в свою очередь, может быть обнаружено, как описано выше, и затем называется ELISA с двойным сэндвичем антител (DAS). Однако обе эти системы имеют недостаток, заключающийся в том, что связывание фермента с антителом может привести к стерическим затруднениям, что, в свою очередь, может привести к потере функции антитела и / или фермента. Это можно преодолеть за счет использования биотин-авидинового или биотин-стрептавидинового мостика. В системе этого типа биотин связан с антителом. Молекула биотина не влияет на работу антител и легко обнаруживается с помощью авидина или стрептавидина, конъюгированных с подходящим ферментом. Стрептавидин имеет чрезвычайно высокое сродство к биотину, что приводит к даже более высокой степени специфичности, чем система, в которой фермент непосредственно связан с антигеном. Чтобы установить, присутствует ли антиген, добавляется субстрат, специфичный для используемого фермента. Затем фермент преобразует субстрат в окрашенный продукт, и интенсивность окраски может быть коррелирована с количеством связанных антител и, следовательно, с количеством присутствующего антигена. Преимущество DAS-ELISA в том, что он может повысить специфичность ELISA и уменьшить возникновение неспецифического связывания. В результате принцип DAS-ELISA обычно используется в ELISA для обнаружения патогенов растений в соке растений без предварительной очистки патогена.
ELISA считается безопасным, недорогим и быстрым методом обнаружения вирусов растений. Его недорогой характер и относительная простота позволяют использовать его в качестве рабочей лошадки в сельскохозяйственном секторе и использовать для проверки тысяч образцов в год. К сожалению, ELISA не является полностью отказоустойчивым. Уровни вируса в клубнях картофеля, которые проверяются методом ELISA для использования в качестве семенного картофеля, обычно низкие, пока клубни находятся в состоянии покоя. Выявление вирусов в этом картофеле с помощью ELISA затруднено, и значения поглощения могут упасть ниже установленного порогового значения. По этой причине скрининг семенных клубней проводится на прорастающих, а не на спящих клубнях. Хотя это приводит к более надежным показаниям, чем прямое тестирование клубней, это задерживает сертификацию семенного картофеля. Другой недостаток иммуно-основанного метода обнаружения состоит в том, что изменения на уровне гена могут влиять на иммуногенность обнаруживаемого антигена. Что касается вирусов растений картофеля, мутации в гене CP могут вызывать конформационные изменения CP, что делает антитела, продуцируемые против ранее присутствующего вируса, менее эффективными.
Полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) стала мощным и эффективным методом обнаружения вирусов растений картофеля в растительном материале картофеля и даже в покоящемся картофеле. Для анализа с помощью ОТ-ПЦР требуется всего лишь небольшой кусочек растительного материала. С учетом протокола, описанного в этой диссертации, 0,1 г растительного материала достаточно для 14 500 отдельных реакций. Во время ОТ-ПЦР специфические последовательности целевой РНК экспоненциально амплифицируются в копии ДНК. Однако для этого РНК вируса должна быть сначала транскрибирована в ДНК с помощью полимеразы обратной транскриптазы. Эта полимераза синтезирует цепь ДНК, используя РНК в качестве матрицы. Это приводит к комплексу ДНК / РНК. Для синтеза цепи ДНК из матрицы РНК требуется только обратный праймер, поскольку РНК представляет собой одну цепь, расположенную от 5 ’до 3’. Впоследствии вновь синтезированная цепь ДНК используется в качестве матрицы для традиционной ПЦР.
Доступны разные типы полимераз обратной транскриптазы для удовлетворения различных потребностей и условий реакции. Обычно используемые ферменты обратной транскриптазы включают AMV RT, SuperScript III, ImProm-II, Omniscript, Sensiscript и Tth RT. В конце стадии RT полимеразный фермент активируется нагреванием. Также может быть, что полимераза обратной транскриптазы и ДНК-полимераза являются одним и тем же ферментом, и что фермент требует только стадии активации ДНК-полимеразы после стадии RT. Примером такого фермента является полимераза Tth. Этот фермент обладает активностью как РНК-зависимой обратной транскриптазы, так и ДНК-зависимой полимеразы. Однако активный центр ДНК-полимеразы покрыт выделенными олигонуклеотидами, которые называются аптамерами. При температурах ниже оптимальной температуры реакции ДНК-зависимый полимеразный компонент Tth остается покрытым аптамерами. При этих температурах фермент Tth синтезирует только ДНК-копию матрицы РНК. После повышения температуры реакции до 95 ° C аптамеры удаляются, и компонент ДНК-зависимой полимеразы начинает амплифицировать целевую последовательность.
ПЦР-амплификация ДНК-мишени происходит в три этапа: денатурация, отжиг и удлинение. Каждый из этих шагов происходит при определенной температуре в течение фиксированного периода времени. Денатурация обычно происходит при температуре от 90 до 95 ° C и приводит к диссоциации цепей ДНК. После этого реакционную смесь охлаждают до температуры от 40 до 70 ° C, чтобы позволить праймерам связываться с их соответствующими последовательностями-мишенями. Этот этап известен как этап отжига и зависит от праймера. Температура, при которой праймеры отжигаются, имеет решающее значение. Слишком высокие температуры не позволят праймерам связываться с ДНК, что приведет к отсутствию или плохой амплификации. Слишком низкая температура отжига в конечном итоге приведет к неспецифическому связыванию праймеров и неспецифической амплификации. Праймеры, связанные с областями, фланкирующими ДНК-мишень, обеспечивают 3’-гидроксильные группы для удлинения, катализируемого ДНК-полимеразой. Наиболее часто используемой ДНК-полимеразой является Taq, термостабильный фермент, выделенный из термофильной бактерии Thermus aquaticus. ДНК-полимераза синтезирует новые цепи ДНК вдоль цепей матрицы, используя праймеры в качестве отправных точек. На этапе удлинения цепи амплифицируются за пределы целевой ДНК. Это означает, что каждая вновь синтезированная цепь ДНК будет иметь область, комплементарную праймеру. Количество продуцируемой ДНК экспоненциально увеличивается, поскольку три вышеупомянутых шага повторяются циклически. В традиционной ПЦР эти шаги можно повторить от 20 до 55 раз. Однако проблема с ПЦР-амплификацией состоит в том, что температура, необходимая для диссоциации цепи ДНК, также приводит к денатурации ДНК-полимеразы. Это частично преодолевается за счет биоинженерии полимераз, которые более термостабильны и имеют более длительный период полураспада.
Несмотря на то, что RT-PCR технически сложнее и дороже, чем ELISA, она позволяет обнаруживать низкие вирусные нагрузки. Считается, что RT-PCR в 102-105 раз более чувствительна, чем традиционный ELISA. ОТ-ПЦР также позволяет обнаруживать несколько вирусных мишеней в одной реакции с использованием нескольких комбинаций праймеров. Это называется мультиплексированием. Хотя мультиплексирование технически более требовательно, чем традиционная симплексная реакция, оно обеспечивает более высокую пропускную способность, так как один образец может быть протестирован на несколько вирусных штаммов за одну реакцию. Праймеры, используемые для мультиплексирования, выбираются таким образом, чтобы они давали ампликоны различного размера. Это позволяет проводить анализ после ОТ-ПЦР с использованием гель-электрофореза. Хотя RT-PCR экономит время, допускает мультиплексирование и более чувствителен, чем ELISA, необходимые реагенты и инструменты дороги и требуют более высокого уровня технических знаний. Кроме того, анализ конечного продукта с использованием гель-электрофореза трудоемок, относительно дороже, требует много времени и не поддается автоматизации. По этим причинам использование ОТ-ПЦР для рутинного скрининга неосуществимо и не заменило ИФА. Однако это дает отрасли возможность выявить пограничные случаи, особенно в случае сертификации семенного картофеля.
В большинстве традиционных ПЦР полученные продукты анализируются после завершения ПЦР. Это называется анализом конечной точки и обычно носит качественный характер, а не количественный. Для этого вида анализа продукты в основном анализируют на агарозном геле и визуализируют с использованием бромида этидия в качестве флуоресцентного красителя. Прямая корреляция между силой сигнала и начальной концентрацией образца невозможна при использовании анализа конечной точки, поскольку эффективность ПЦР снижается по мере приближения реакции к фазе плато. Количественная ПЦР, однако, предлагает точную и быструю альтернативу традиционной ПЦР. Количественная ПЦР предлагает исследователю возможность усилить и проанализировать продукт в одной пробирке с использованием флуоресцентных красителей. Это известно как гомогенная ПЦР. Во время количественной ПЦР увеличение флуоресценции коррелирует с увеличением продукта. Благодаря использованию различных специфичных красителей количественная ПЦР может использоваться для различения различных штаммов вируса и даже для обнаружения точечных мутаций. Основное преимущество количественной ПЦР состоит в том, что не требуется анализ полученных продуктов с помощью гель-электрофореза. Это означает, что количественная ПЦР может быть реализована как высокопроизводительный метод скрининга образцов.
Количественная ПЦР описана для обнаружения и различения изолятов PVY и PVY, а также для надежного различения изолятов PVY и PVY.
