Анализ фосфоаминокислоты

Анализ фосфоаминокислоты, или PAA, представляет собой экспериментальный метод, используемый в молекулярной биологии для определения того, какая аминокислота или кислоты фосфорилируются в белке.

Сначала белок фосфорилируют с использованием P-меченого АТФ, обычно с помощью анализа киназы in vitro. Затем большая часть аминокислот в белке гидролизуется, обычно с использованием сильной кислоты, такой как соляная кислота. Эти аминокислоты затем разделяются с помощью двумерной тонкослойной хроматографии вместе со стандартами аминокислот для трех аминокислот, которые фосфорилируются у эукариот: серин, треонин и тирозин. Эти стандарты аминокислот можно визуализировать на субстрате для ТСХ путем воздействия нингидрином, который окрашивает аминокислоты в видимый пурпурный цвет при нагревании до ~ 100 ° C. Радиоактивные аминокислоты могут быть обнаружены с помощью авторадиографии, и наложение двух изображений покажет, какие аминокислоты фосфорилируются.

• Rothberg, PG, Harris, TJR, Nomoto, A., and Wimmer, E. (1978) O4- (5'-уридилил) тирозин представляет собой связь между геном-связанным белком и РНК полиовируса. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 75, 4868-4872.
• Eckhart, W., Hutchinson, M.A., and Hunter, T. (1979) Активность фосфорилирования тирозина в иммунопреципитатах полиомного Т-антигена. Ячейка 18, 925-933.