Войти
Диаграмма, иллюстрирующая метод вложенной ПЦР. Вложенная полимеразная цепная реакция (Вложенная ПЦР ) представляет собой модификацию полимеразной цепной реакции, предназначенную для уменьшения неспецифического связывания в продуктах из-за амплификации неожиданного праймера bi поиск сайтов.
Полимеразная цепная реакция - это процесс, используемый для амплифицировать образцы ДНК с помощью температурно-опосредованной ДНК-полимеразы. Продукты могут использоваться для секвенирования или анализа, и этот процесс является ключевой частью многих исследовательских лабораторий генетики, наряду с использованием ДНК-отпечатков для судебно-медицинская экспертиза и другие генетические случаи человека. Обычная ПЦР требует праймеров, комплементарных концам целевой ДНК. Количество продукта ПЦР увеличивается с количеством температурных циклов, которым подвергается реакция. Часто встречающаяся проблема - связывание праймеров с неправильными участками ДНК, приводящее к неожиданным продуктам. Эта проблема становится более вероятной при увеличении количества циклов ПЦР.
Вложенная полимеразная цепная реакция включает два набора праймеров, используемых в двух последовательных прогонах полимеразной цепной реакции, второй набор предназначен для амплификации вторичной мишени в продукте первого прогона. Это позволяет амплифицировать небольшое количество прогонов в первом цикле, ограничивая неспецифические продукты. Второй набор вложенных праймеров должен амплифицировать только целевой продукт из первого раунда амплификации, а не неспецифический продукт. Это позволяет запускать больше полных циклов при минимальном количестве неспецифических продуктов. Это полезно для редких шаблонов или ПЦР с высоким уровнем фона.
Целевая ДНК подвергается первому запуску полимеразной цепной реакции с первым набором праймеров, показанных зеленым. Выбор альтернативных и подобных сайтов связывания праймеров дает выбор продуктов, только один из которых содержит заданную последовательность.
Продукт из первой реакции подвергается второму прогону со вторым набором праймеров, показанных красным. Очень маловероятно, что какой-либо из нежелательных продуктов ПЦР содержит сайты связывания для обоих новых праймеров, что гарантирует, что продукт второй ПЦР имеет небольшое загрязнение нежелательными продуктами димеров праймеров, шпилек и альтернативных последовательностей-мишеней праймеров.
.
