Пептид гибридизации коллагена

редактировать

Схема цепи CHP (помечена X) гибридизация с цепями денатурированного коллагена и образование тройной спирали коллагена. Во время прогрессирования заболевания, развития тканей или старения коллаген может сильно разлагаться коллагенолитическими протеазами, в результате чего его тройная спираль разворачивается при физиологической температуре из-за пониженной термической стабильности. X может представлять биотин или флуоресцентную метку.

A гибридизующийся пептид с коллагеном (CHP ) представляет собой последовательность синтетического пептида с обычно от 6 до 10 повторяющихся единиц Gly-Xaa -Yaa триплет аминокислоты, который имитирует характерную последовательность природных коллагенов. Пептид CHP обычно имеет высокое содержание пролина и гидроксипролина в положениях Xaa и Yaa, что придает ему сильную склонность к образованию уникальной тройной спирали коллагена конформация. В одноцепочечном (мономерном) статусе пептид может распознавать денатурированные нити коллагена в тканях, образуя гибридизованную тройную спираль с нитями коллагена. Это происходит посредством сборки тройной спиральной цепи и межцепочечных водородных связей, аналогично связыванию праймеров с расплавленными цепями ДНК во время ПЦР. Связывание не зависит от конкретной последовательности или эпитопа на коллагене, что позволяет CHP нацеливаться на денатурированные цепи коллагена различных типов.

Содержание

  • 1 Коллаген, CHP, CMP и CLP
  • 2 Механизм связывания
  • 3 Денатурированный коллаген как биомаркер ремоделирования и повреждения тканей
  • 4 Области применения
    • 4.1 Окрашивание тканей
    • 4.2 Визуализация in vivo
    • 4.3 Идентификация коллагена
    • 4.4 Выявление механических повреждений соединительной ткани
  • 5 Ссылки

Коллаген, CHP, CMP и CLP

Схема, показывающая взаимосвязь между CMP и CHP. Тройные спиральные CMP могут быть нагреты (выше определенной температуры) для диссоциации на мономерные CHP; при охлаждении нити КГП могут повторно собираться в тройную спираль с течением времени.

Коллаген является основным компонентом внеклеточного матрикса (ЕСМ). Суперсемейство коллагена состоит из 28 различных типов коллагена. Хотя функция и иерархическая структура этих коллагенов могут различаться, все они являются определяющим структурным признаком, известным как тройная спираль, где три левые спирали полипролина II типа (PPII) собираются, образуя правостороннюю спираль. суперскрученный спиральный мотив. Короткие синтетические пептиды, известные как пептиды-миметики коллагена (CMP) или коллагеноподобные пептиды (CLP), сыграли важную роль в выяснении трехмерной структуры коллагена тройной спирали, его кинетики складывания и небольшой термостабильности. тройные спиральные модели. Все CMP, CLP и CHP очень похожи с точки зрения их аминокислотных последовательностей, но только когда CMP или CLP нагреваются выше их температур плавления, они существуют в диссоциированном, одноцепочечном состоянии и могут рассматриваться как CHP.

Механизм связывания

Одноцепочечные КНР связываются с денатурированными цепями коллагена и желатином способом, который отличается от других механизмов нацеливания, поскольку они специфически распознают уникальный структурный мотив ( тройная спираль коллагена ) для сворачивания и сборки цепи, в отличие от связывания специфических эпитопов, которое наблюдается, например, для моноклональных антител (mAb). Благодаря своему уникальному механизму нацеливания, CHP обладают высокой специфичностью связывания с денатурированными цепями коллагена, но почти не имеют сродства к интактному (тройной спирали) коллагену. КГП могут широко нацеливаться на цепи коллагена, денатурированные термическими, химическими, механическими или ферментативными процессами, а также на несколько типов коллагена (например, Col ​​I, II, IV ). Исследования также показали, что КГП и их флуорофорные конъюгаты обладают превосходной стабильностью при контакте с сывороткой.

Денатурированный коллаген как биомаркер ремоделирования и повреждения тканей

Флуоресцентное изображение осевого поперечного сечения сердца мыши на 14-й день постинфаркт миокарда, окрашенный Hoechst 33342 (синий) и меченный биотином CHP (обнаруженный с помощью AlexaFluor647-стрептавидина, красный). Масштабная линейка: 1 мм.

Контролируемый оборот коллагена имеет решающее значение для эмбрионального развития, морфогенеза органов, а также для поддержания и восстановления тканей. Однако изменения гомеостаза коллагена связаны с многочисленными заболеваниями и патологическими состояниями. Чрезмерная деградация коллагена может быть связана с метастазами рака, старением кожи, артритом и остеопорозом. CHP могут нацеливаться на ткани, претерпевающие ремоделирование, на основе их способности связываться с разрушенными и развернутыми коллагеновыми цепями посредством образования тройной спирали. В качестве нацеливающего фрагмента КГП обладают большим потенциалом в гистопатологии, диагностике и доставке лекарств при широком спектре заболеваний.

Большинство методов оценки денатурации коллагена при болезненных состояниях являются косвенными, такими как определение активности матриксной металлопротеиназы (ММП) или количественное определение пептидных фрагментов коллагена в моче, сыворотке или синовиальной оболочке. жидкость. Используя обычные методы прямого воздействия на коллаген, исследователи должны полагаться на пептиды, связывающие коллаген, отобранные с помощью фагового дисплея, полученные из связывающих коллаген белков, или антител, вырабатываемых против коллагенов. К сожалению, эти соединения не могут воздействовать на денатурированные коллагены, которые неструктурированы и не представляют определенный 3D-эпитоп. Кроме того, антитела, которые, как сообщалось, распознают определенные деградированные фрагменты коллагена, могут распознавать только один или несколько типов коллагена. Напротив, КГП в принципе могут связываться со всеми типами денатурированных коллагенов.

Применения

Окрашивание тканей

Флуоресцентное изображение сагиттального среза 18 d.p.c. эмбрион мыши, дважды окрашенный биотинилированным-CHP (обнаруженный AlexaFluor647-стрептавидином, оранжевый) и антителом против коллагена I (обнаруженный меченным AlexaFluor555 ослиным анти-кроличьим IgG HL, голубой). mx, maxilla; md, нижнечелюстная кость; bp, базисфеноидная кость; бо, базиокципитальная кость; vc, позвоночник; rb, ребро; h, бедренная кость; г, пальцевые кости. Шкала: 3 мм.

меченные флуорофором или биотином КГП используются в качестве окрашивающего агента для обнаружения деградации и денатурации коллагена с помощью приложений иммунофлуоресценции и иммуногистохимии. CHP могут окрашивать срезы замороженных тканей, срезы, залитые в формалин, залитые парафином (FFPE), а также свежие ткани. CHP применим к образцам тканей разных видов и целого ряда заболеваний, таких как инфаркт миокарда, артрит, нефрит и фиброз.

Визуализация in vivo

КГП также могут быть помечены флуорофорами ближнего инфракрасного диапазона для флуоресцентной визуализации in vivo.

Идентификация коллагена

КГП можно использовать для визуализации многих различных типов полос коллагена в гелях SDS-PAGE. Коллаген денатурируется нагреванием в присутствии SDS перед нанесением геля. Полосы коллагена визуализируются посредством гибридизации КГП-коллаген, когда гели окрашиваются флуоресцентно-меченными КГП.

Обнаружение механических повреждений соединительной ткани

Коллаген обеспечивает механическую прочность несущих нагрузку тканей тела такие как сухожилия, связки и кости. При приложении сил к этим тканям тройная спираль коллагена может быть повреждена и раскручена, а КГЧ позволяют обнаруживать механическое повреждение в таких соединительных тканях на молекулярном уровне.

Ссылки

Последняя правка сделана 2021-05-15 14:45:11
Содержание доступно по лицензии CC BY-SA 3.0 (если не указано иное).
Обратная связь: support@alphapedia.ru
Соглашение
О проекте