Войти
Катепсиновая зимография - это метод количественной оценки ферментативной активности цистеиновых протеаз семейства катепсинов. Он основан на SDS-PAGE, при котором образцы, проверенные на активность катепсина, загружаются в полиакриламидный гель и затем разделяются по молекулярной массе. Желатин встроен в сам гель, обеспечивая субстрат для гидролиза ферментов.
Хотя проформа катепсинов обычно стабильна, после активации протеазы, такие как катепсин K, уязвимы для инактивации в средах с нейтральным pH. Эта потеря активности затрудняет обнаружение этих ферментов. Зимография, благодаря своей высокой чувствительности и мультиплексной природе, позволяет одновременно различать несколько катепсинов. Очень небольшие количества ферментативной активности могут быть выяснены, и они способны разрешить фемтомоль активности катепсина К.
Образцы тканей лизируют в буфере с добавлением лейпептина для поддержания ферментативной активности. Образцы стандартизируют по концентрации белка, а затем загружают в полиакриламидный гель для SDS-PAGE. После завершения разделения белков по молекулярной массе гель инкубируют в ренатурирующем буфере для восстановления ферментативной активности. Во время загрузки использовали невосстанавливающий буфер для сохранения белковых дисульфидных связей. После периода ренатурации гель затем инкубируют в буфере для анализа, чтобы позволить активным катепсинам протеолизовать желатин, пропитанный гелем. Этот процесс происходит в мгновение ока. На следующий день гель анализируют на наличие участков разложения желатина путем окрашивания кумасси синим. Отмечаются пятна геля, которые перестают быть синими после обесцвечивания. Эти полосы затем коррелируют с их соответствующими молекулярными массами, чтобы определить, какие катепсины были активными в образце.
Обнаружение катепсина K с помощью зимографии
Зимографические методы обнаружения катепсинов K, L, S и V
Зимография для выявления рака с катепсинами в качестве биомаркеров
Зимография для катепсина К. 
Биологический портал 